Mikroplaster i otitis media med effusionsmaterial

Denna studie planerades prospektivt. Med etiskt godkännande inkluderades patienter som följdes av bilateral OME i minst tre månader eller ensidig OME i minst 9 månader till studien. Patienter med kraniofacial anomali, gomspalt, som tidigare haft öronkirurgi exkluderades. De opererades som paracentesis och ventilationsrörimplementering (VTI). Ett informerat samtyckesformulär erhölls från dem och deras föräldrar.

Operation: Kirurgisk indikation gjordes enligt sjukdomens varaktighet och/eller hörselnedsättning. Patienterna opererades under generell anestesi. Paracentes gjordes från posteroinferior kvadrant av trumhinnan. Glu-material fångades i sugröret och överfördes till glasrör omedelbart (Figur 1). För detta användes en spruta av glas och 0,9 % fysiologiskt serum. Prover skickades från höger och vänster öra separat. Bestämning av mikroplaster gjordes i miljötekniska laboratoriet vid tekniska fakulteten.

Bestämningsmetod för mikroplast: Den tillämpades enligt Prada et. al rapport (11). Fragment, förutom blodproppar, tvättades med en stråle av filtrerat destillerat vatten inuti laminärt flödeshuven för att avlägsna eventuell ytkontamination och alla prover vägdes in i slutna glaskolvar till närmaste 0,1 mg (Sartorius, Entris, Tyskland). En metod för att förbereda biologiska prover för Nile Red-färgning, som tidigare utvecklats och testats, följdes [16]: (i) inkubation i 24 timmar vid 60 °C (Oasis™ Benchtop IR CO2 Incubator, Caron, OH, USA) i 30 ml av 10 % KOH (vikt/volym, >85 %, Labchem, PA, USA); (ii) vid 24 timmar höjdes temperaturen till kokpunkten och lösningen filtrerades omedelbart på glasfiberfiltermembran (1,2) µm por, Whatman® GF/C, Little Chalfont, Buckinghamshire, UK) monterad i ett vakuumglasfiltreringssystem; (iii) 100 ml kokande filtrerat destillerat vatten filtrerades för att avlägsna tvålar; (iv) 10 ml aceton sattes till koppen under 10 min; (v) ytterligare 10 ml aceton filtrerades för att avlägsna lipofilt material; (vi) 0,5-1 ml av 0,01 mg ml-1 Nile Red (mikroskopikvalitet, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) sattes till koppen under 5 min; (vii) 50 ml destillerat vatten filtrerades; och (viii) förvaras i petriskålar av glas förvarade i kartonger i en vecka för att torka i rumstemperatur (20 °C).

Åtgärder för kontroll av kontaminering Strikta åtgärder för kontroll av kontaminering genomfördes i alla faser, nämligen genom att: (i) bära laboratorierockar i bomull och rena handskar; (ii) arbete i kåpan med laminärt flöde i ett rent rum, underhållet genom rengöring med etanol i pappershanddukar följt av rengöring med en dammduk som attraherar och fångar dammpartiklar och pappersfibrer; (iii) filtrering av alla lösningar (1,2 µm por, Whatman® GF/C); (iv) användning av glas- och metallmaterial; (v) dekontaminering av glasmaterial genom att doppa dem i 10 % HNO3 i minst 30 minuter och skölja med destillerat vatten; (vi) ytterligare rengöring av petriskålar av glas med en N2-luftstråle; (vii) bränning av glasmikrofiberfiltermembran vid 450 °C under 3 timmar; (viii) rengöring av koppen av filtreringssystemet mellan proverna genom att doppa den i 15 s i en lösning (första sats: aceton, andra sats: 30 % HNO3) följt av doppning i destillerat vatten; (ix) hålla provbehållare stängda så mycket som möjligt med glaslock, lock eller aluminiumfolie; och (x) utföra procedurblindprov (lösningar utan prov som exponerats för provberedningsförfaranden) för varje batch. Varje prov testades tre gånger för verifiering. Dessutom utvärderades mikroplaster i serumpsykologiskt för att förhindra kontaminering.