Mikromuovia välikorvatulehduksessa effuusiomateriaalilla

Tämä tutkimus oli suunniteltu tulevaisuuteen. Eettisellä hyväksynnällä tutkimukseen otettiin potilaat, joita seurasi kahdenvälinen OME vähintään kolmen kuukauden ajan tai yksipuolinen OME vähintään 9 kuukauden ajan. Potilaat, joilla oli kallon kasvojen poikkeavuus, suulakihalkio ja joilla oli aiempi korvaleikkaus, suljettiin pois. Niitä käytettiin paracenteesi- ja ventilaatioputkitoteutuksena (VTI). Heiltä ja heidän vanhemmiltaan saatiin tietoinen suostumuslomake.

Leikkaus: Kirurginen indikaatio tehtiin sairauden keston ja/tai kuulonaleneman perusteella. Potilaat leikattiin yleisanestesiassa. Parasenteesi tehtiin tärykalvon posteroinferiorista kvadrantista. Liimamateriaali jäi loukkuun imuputkeen ja siirrettiin välittömästi lasiputkiin (kuva 1). Tätä varten käytettiin lasiruiskua ja 0,9 % fysiologista seerumia. Näytteet lähetettiin oikeasta ja vasemmasta korvasta erikseen. Mikromuovimääritys tehtiin tekniikan tiedekunnan ympäristötekniikan laboratoriossa.

Mikromuovien määritysmenetelmä: Käytettiin Prada et. al-raportti (11). Fragmentit, paitsi verihyytymät, pestiin suodatetun tislatun veden suihkulla laminaarivirtauskuvun sisällä mahdollisen pintakontaminaation poistamiseksi ja kaikki näytteet punnittiin suljetuissa lasipulloissa 0,1 mg:n tarkkuudella (Sartorius, Entris, Saksa). Noudatettiin aiemmin kehitettyä ja testattua menetelmää biologisten näytteiden valmistamiseksi Niilinpunavärjäystä varten [16]: (i) inkubointi 24 tuntia 60 °C:ssa (Oasis™ Benchtop IR CO2 Incubator, Caron, OH, USA) 30 ml:ssa 10 % KOH (paino/tilavuus, > 85 %, Labchem, PA, USA); (ii) 24 tunnin kohdalla lämpötila nostettiin kiehumispisteeseen ja liuos suodatettiin välittömästi lasikuitusuodatinkalvolla (1,2). µm pore, Whatman® GF/C, Little Chalfont, Buckinghamshire, UK) asennettuna tyhjiölasisuodatusjärjestelmään; (iii) 100 ml kiehuvaa suodatettua tislattua vettä suodatettiin saippuoiden poistamiseksi; (iv) 10 ml asetonia lisättiin kuppiin 10 minuutin ajaksi; (v) vielä 10 ml asetonia suodatettiin lipofiilisen aineen poistamiseksi; (vi) 0,5-1 ml 0,01 mg ml-1 Niilinpunaista (mikroskooppinen laatu, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) lisättiin kuppiin 5 minuutin ajaksi; (vii) 50 ml tislattua vettä suodatettiin; ja (viii) säilytetään lasisissa petrimaljoissa, joita säilytetään pahvilaatikoissa viikon ajan huoneenlämmössä (20 °C) kuivumaan.

Kontaminaatiovalvontatoimenpiteet Tiukat kontaminaatiovalvontatoimenpiteet toteutettiin kaikissa vaiheissa, nimittäin: (i) käyttämällä puuvillaisia ​​laboratoriotakkeja ja puhtaita käsineitä; (ii) työskentely laminaarivirtauskuvussa puhtaassa huoneessa, jota ylläpidetään puhdistamalla paperipyyhkeissä olevalla etanolilla ja sen jälkeen puhdistamalla pölyharjalla, joka houkuttelee ja vangitsee pölyhiukkasia ja paperikuituja; (iii) suodatetaan kaikki liuokset (1,2 um huokoset, Whatman® GF/C); iv) lasi- ja metallimateriaalien käyttö; (v) lasimateriaalien puhdistaminen upottamalla ne 10-prosenttiseen HNO3:een vähintään 30 minuutiksi ja huuhtelemalla tislatulla vedellä; (vi) puhdistetaan lisäksi lasisia petrimaljoja N2-ilmasuihkulla; (vii) lasimikrokuitusuodatinkalvojen polttaminen 450 °C:ssa 3 tunnin ajan; (viii) suodatusjärjestelmän kupin puhdistaminen näytteiden välillä upottamalla se 15 sekunniksi liuokseen (ensimmäinen erä: asetoni, toinen erä: 30 % HNO3), minkä jälkeen kasto tislattuun veteen; (ix) näyteastioiden pitäminen mahdollisimman suljettuina lasikannilla, korkilla tai alumiinifoliolla; ja (x) suoritetaan menettelyn nollanäytteet (liuokset, joissa näytteitä ei ole altistettu näytteenvalmistusmenettelyille) jokaiselle erälle. Jokainen näyte testattiin kolme kertaa varmuuden vuoksi. Lisäksi mikromuoveja arvioitiin seerumin psyisologiassa kontaminaation estämiseksi.