Microplásticos en otitis media con material de efusión

Este estudio se planificó de forma prospectiva. Con aprobación ética, se inscribieron en el estudio pacientes que fueron seguidos por OME bilateral al menos durante tres meses o OME unilateral al menos durante 9 meses. Se excluyeron pacientes con anomalía craneofacial, paladar hendido, con antecedentes de cirugía de oreja previa. Fueron operados como paracentesis e implementación de tubos de ventilación (VTI). Se obtuvo un formulario de consentimiento informado de ellos y de sus padres.

Operación: La indicación quirúrgica se realizó según duración de la enfermedad y/o pérdida auditiva. Los pacientes fueron operados bajo anestesia general. La paracentesis se realizó en el cuadrante posteroinferior de la membrana timpánica. El material de pegamento quedó atrapado en el tubo de succión y se transfirió a tubos de vidrio inmediatamente (Figura 1). Para ello se utilizó jeringa de vidrio y suero fisiológico al 0,9 %. Las muestras se enviaron del oído derecho e izquierdo por separado. La determinación de microplásticos se realizó en el Laboratorio de Ingeniería Ambiental de la Facultad de Ingeniería.

Método de determinación de microplásticos: Se aplicó según Prada et. informe completo (11). Los fragmentos, excepto los coágulos de sangre, se lavaron con un chorro de agua destilada filtrada dentro de la campana de flujo laminar para eliminar cualquier contaminación de la superficie y todas las muestras se pesaron dentro de matraces de vidrio cerrados con una precisión de 0,1 mg (Sartorius, Entris, Alemania). Se siguió un método para preparar muestras biológicas para la tinción con Rojo Nilo, previamente desarrollado y probado [16]: (i) incubación durante 24 h a 60 °C (incubadora de CO2 IR de sobremesa Oasis™, Caron, OH, EE. UU.) en 30 ml de KOH al 10 % (p/v, ≥85 %, Labchem, PA, EE. UU.); (ii) a las 24 h, se elevó la temperatura hasta el punto de ebullición y la solución se filtró inmediatamente sobre una membrana filtrante de fibra de vidrio (1,2 poro µm, Whatman® GF/C, Little Chalfont, Buckinghamshire, Reino Unido) montado en un sistema de filtración de vidrio al vacío; (iii) se filtraron 100 ml de agua destilada filtrada hirviendo para eliminar los jabones; (iv) se agregaron 10 ml de acetona a la copa durante 10 min; (v) se filtraron 10 ml adicionales de acetona para eliminar la materia lipófila; (vi) se agregaron a la copa 0,5-1 ml de 0,01 mg ml-1 de rojo Nilo (grado de microscopía, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE. UU.) durante 5 min; (vii) se filtraron 50 ml de agua destilada; y (viii) almacenados en cajas de Petri de vidrio dentro de cajas de cartón durante una semana para que se sequen a temperatura ambiente (20 °C).

Medidas de control de la contaminación Se llevaron a cabo estrictas medidas de control de la contaminación en todas las fases, a saber: (i) usar batas de laboratorio de algodón y guantes limpios; (ii) trabajar en la campana de flujo laminar en una sala limpia, mantenida mediante limpieza con etanol en toallas de papel seguida de limpieza con un plumero que atrae y atrapa partículas de polvo y fibras de papel; (iii) filtrar todas las soluciones (poro de 1,2 µm, Whatman® GF/C); (iv) utilizar materiales de vidrio y metal; (v) descontaminar los materiales de vidrio sumergiéndolos en HNO3 al 10% durante al menos 30 min y enjuagando con agua destilada; (vi) limpiar adicionalmente placas de Petri de vidrio con un chorro de aire de N2; (vii) quemar membranas filtrantes de microfibra de vidrio a 450 °C durante 3 h; (viii) limpiar la copa del sistema de filtración entre muestras sumergiéndola durante 15 s en una solución (primer lote: acetona, segundo lote: 30% HNO3) seguido de inmersión en agua destilada; (ix) mantener los recipientes de muestras cerrados tanto como sea posible con tapas de vidrio, cápsulas o papel de aluminio; y (x) realizar blancos de procedimiento (soluciones sin muestras expuestas a procedimientos de preparación de muestras) para cada lote. Cada muestra fue analizada tres veces para su verificación. Además, se evaluaron microplásticos en suero psicológico para prevenir la contaminación.