Microplastiche nell'otite media con materiale di effusione

Questo studio è stato pianificato in modo prospettico. Con l'approvazione etica, sono stati arruolati nello studio i pazienti seguiti con OME bilaterale per almeno tre mesi o con OME unilaterale per almeno 9 mesi. Sono stati esclusi i pazienti con anomalie craniofacciali, palatoschisi e con anamnesi di precedente intervento chirurgico all'orecchio. Sono stati operati come paracentesi e implementazione del tubo di ventilazione (VTI). A loro e ai loro genitori è stato ottenuto un modulo di consenso informato.

Intervento: l'indicazione chirurgica è stata fatta in base alla durata della malattia e/o alla perdita dell'udito. I pazienti sono stati operati in anestesia generale. La paracentesi è stata effettuata dal quadrante postero-inferiore della membrana timpanica. Il materiale adesivo è stato intrappolato nel tubo di aspirazione e trasferito immediatamente nei tubi di vetro (Figura 1). A tale scopo sono stati utilizzati siringa di vetro e siero fisiologico allo 0,9%. I campioni sono stati inviati separatamente dall'orecchio destro e da quello sinistro. La determinazione delle microplastiche è stata effettuata nel Laboratorio di Ingegneria Ambientale della Facoltà di Ingegneria.

Metodo di determinazione delle microplastiche: applicato secondo Prada et. al rapporto (11). I frammenti, ad eccezione dei coaguli di sangue, sono stati lavati con un getto di acqua distillata filtrata all'interno della cappa a flusso laminare per rimuovere qualsiasi contaminazione superficiale e tutti i campioni sono stati pesati all'interno di matracci di vetro chiusi con l'approssimazione di 0,1 mg (Sartorius, Entris, Germania). È stato seguito un metodo per preparare campioni biologici per la colorazione Nile Red, precedentemente sviluppato e testato [16]: (i) incubazione per 24 ore a 60 °C (Oasis™ Benchtop IR CO2 Incubator, Caron, OH, USA) in 30 mL di KOH al 10% (p/v, ≥85%, Labchem, PA, USA); (ii) dopo 24 ore, la temperatura è stata portata al punto di ebollizione e la soluzione è stata immediatamente filtrata su membrana filtrante in fibra di vetro (1.2 pori µm, Whatman® GF/C, Little Chalfont, Buckinghamshire, UK) montato in un sistema di filtrazione del vetro sotto vuoto; (iii) 100 mL di acqua distillata filtrata bollente sono stati filtrati per rimuovere i saponi; (iv) 10 mL di acetone sono stati aggiunti alla tazza per 10 minuti; (v) altri 10 mL di acetone furono filtrati per rimuovere la materia lipofila; (vi) 0,5-1 mL di 0,01 mg mL-1 di Nile Red (grado per microscopia, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) sono stati aggiunti alla tazza per 5 minuti; (vii) 50 mL di acqua distillata sono stati filtrati; e (viii) conservati in piastre Petri di vetro conservate all'interno di scatole di cartone per una settimana ad asciugare a temperatura ambiente (20 °C).

Misure di controllo della contaminazione Sono state condotte rigorose misure di controllo della contaminazione in tutte le fasi, vale a dire: (i) indossando camici da laboratorio di cotone e guanti puliti; (ii) lavoro nella cappa a flusso laminare in una camera bianca, mantenuta mediante pulizia con etanolo in salviette di carta seguita da pulizia con uno spolverino che attira e intrappola le particelle di polvere e le fibre di carta; (iii) filtrare tutte le soluzioni (poro da 1,2 µm, Whatman® GF/C); (iv) utilizzo di materiali vetrosi e metallici; (v) decontaminare i materiali di vetro immergendoli in HNO3 al 10% per almeno 30 minuti e risciacquando con acqua distillata; (vi) pulire inoltre le piastre Petri in vetro con un getto d'aria di N2; (vii) membrane filtranti in microfibra di vetro bruciate a 450 ° C per 3 ore; (viii) pulire la coppa del sistema di filtraggio tra i campioni immergendola per 15 s in una soluzione (primo lotto: acetone, secondo lotto: 30% HNO3) seguita da immersione in acqua distillata; (ix) tenere i contenitori dei campioni chiusi il più possibile con coperchi di vetro, tappi o fogli di alluminio; e (x) condurre bianchi procedurali (soluzioni senza campioni esposti a procedure di preparazione dei campioni) per ciascun lotto. Ciascun campione è stato testato tre volte per la verifica. Inoltre, le microplastiche sono state valutate nel siero a livello psicologico per prevenire la contaminazione.