Mikroplasty v zánětu středního ucha s výpotkem

Tato studie byla plánována prospektivně. S etickým souhlasem byli do studie zařazeni pacienti, kteří byli sledováni bilaterální OME alespoň po dobu tří měsíců nebo jednostrannou OME alespoň po dobu 9 měsíců. Pacienti s kraniofaciální anomálií, rozštěpem patra, po předchozí operaci ucha v anamnéze byli vyloučeni. Byly operovány jako paracentéza a implementace ventilační trubice (VTI). Od nich a jejich rodičů byl získán formulář informovaného souhlasu.

Operace: Chirurgická indikace byla provedena podle délky onemocnění a/nebo ztráty sluchu. Pacienti byli operováni v celkové anestezii. Paracentéza byla provedena z posteroinferiorního kvadrantu bubínku. Glu materiál byl zachycen v sací trubici a okamžitě přenesen do skleněných trubic (obrázek 1). K tomu byla použita skleněná injekční stříkačka a 0,9% fyziologické sérum. Vzorky byly odeslány z pravého a levého ucha zvlášť. Stanovení mikroplastů bylo provedeno v laboratoři environmentálního inženýrství Fakulty strojní.

Metoda stanovení mikroplastů: Aplikováno podle Prada et. al zpráva (11). Fragmenty, kromě krevních sraženin, byly promyty proudem filtrované destilované vody uvnitř digestoře s laminárním prouděním, aby se odstranila jakákoli povrchová kontaminace a všechny vzorky byly zváženy v uzavřených skleněných baňkách s přesností na 0,1 mg (Sartorius, Entris, Německo). Byla dodržena metoda přípravy biologických vzorků pro barvení nilskou červení, dříve vyvinutá a testovaná [16]: (i) inkubace po dobu 24 hodin při 60 °C (Oasis™ Benchtop IR CO2 inkubátor, Caron, OH, USA) v 30 ml 10% KOH (hmotn./obj., >85 %, Labchem, PA, USA); (ii) po 24 h byla teplota zvýšena na bod varu a roztok byl okamžitě přefiltrován přes filtrační membránu ze skleněných vláken (1.2 um pórů, Whatman® GF/C, Little Chalfont, Buckinghamshire, UK) namontované ve vakuovém skleněném filtračním systému; (iii) 100 ml vroucí filtrované destilované vody bylo přefiltrováno, aby se odstranila mýdla; (iv) 10 ml acetonu bylo přidáno do nádobky po dobu 10 minut; (v) dalších 10 ml acetonu bylo přefiltrováno, aby se odstranila lipofilní hmota; (vi) 0,5-1 ml 0,01 mg ml-1 nilské červeně (mikroskopická kvalita, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) byl přidán do pohárku po dobu 5 minut; (vii) 50 ml destilované vody bylo filtrováno; a (viii) skladovány ve skleněných Petriho miskách uchovávaných v kartonových krabicích po dobu jednoho týdne, aby se vysušily při pokojové teplotě (20 °C).

Opatření pro kontrolu kontaminace Ve všech fázích byla provedena přísná opatření pro kontrolu kontaminace, a to: (i) nošením bavlněných laboratorních plášťů a čistých rukavic; (ii) práce v digestoři s laminárním prouděním v čisté místnosti udržované čištěním etanolem v papírových utěrkách s následným čištěním prachovkou, která přitahuje a zachycuje prachové částice a papírová vlákna; (iii) filtrace všech roztoků (1,2 um póry, Whatman® GF/C); (iv) používání skleněných a kovových materiálů; (v) dekontaminaci skleněných materiálů jejich ponořením do 10% HNO3 po dobu alespoň 30 minut a opláchnutím destilovanou vodou; (vi) dodatečné čištění skleněných Petriho misek proudem vzduchu N2; (vii) pálení skleněných mikrovláknových filtračních membrán při 450 °C po dobu 3 hodin; (viii) čištění misky filtračního systému mezi vzorky ponořením na 15 s do roztoku (první várka: aceton, druhá várka: 30% HNO3) s následným ponořením do destilované vody; (ix) udržování nádob na vzorky co nejvíce uzavřených skleněnými víčky, uzávěry nebo hliníkovou fólií; a (x) provádění procedurálních slepých pokusů (roztoky bez vzorků vystavených postupům přípravy vzorků) pro každou šarži. Každý vzorek byl testován třikrát pro ověření. Kromě toho byly mikroplasty hodnoceny v séru psychologicky, aby se zabránilo kontaminaci.