Microplastiques dans l'otite moyenne avec épanchement

Cette étude a été planifiée de manière prospective. Avec l'approbation éthique, les patients suivis par une OME bilatérale pendant au moins trois mois ou une OME unilatérale pendant au moins 9 mois ont été inscrits à l'étude. Les patients présentant une anomalie cranio-faciale, une fente palatine et des antécédents de chirurgie de l'oreille ont été exclus. Ils ont été opérés en paracentèse et en mise en place de tubes de ventilation (VTI). Un formulaire de consentement éclairé a été obtenu auprès d'eux et de leurs parents.

Opération : L'indication chirurgicale a été faite en fonction de l'ancienneté de la maladie et/ou de la surdité. Les patients ont été opérés sous anesthésie générale. La paracentèse a été réalisée à partir du quadrant postéro-inférieur de la membrane tympanique. Le matériau Glu a été piégé dans le tube d’aspiration et immédiatement transféré dans des tubes en verre (Figure 1). Pour cela, une seringue en verre et du sérum physiologique à 0,9 % ont été utilisés. Les échantillons ont été envoyés séparément de l’oreille droite et de l’oreille gauche. La détermination des microplastiques a été effectuée au laboratoire de génie environnemental de la faculté de génie.

Méthode de détermination des microplastiques : appliquée selon Prada et. rapport al (11). Les fragments, à l'exception des caillots sanguins, ont été lavés avec un jet d'eau distillée filtrée à l'intérieur de la hotte à flux laminaire pour éliminer toute contamination de surface et tous les échantillons ont été pesés dans des flacons en verre fermés à 0,1 mg près (Sartorius, Entris, Allemagne). Une méthode de préparation d'échantillons biologiques pour la coloration au Nile Red, précédemment développée et testée, a été suivie [16] : (i) incubation pendant 24 h à 60 °C (Incubateur à CO2 IR Oasis™ Benchtop, Caron, OH, USA) dans 30 mL de 10 % de KOH (p/v, ≥85 %, Labchem, PA, USA) ; (ii) au bout de 24 h, la température a été portée à ébullition et la solution a été immédiatement filtrée sur une membrane filtrante en fibre de verre (1,2 µm de pores, Whatman® GF/C, Little Chalfont, Buckinghamshire, Royaume-Uni) montés dans un système de filtration en verre sous vide ; (iii) 100 ml d'eau distillée filtrée bouillante ont été filtrés pour éliminer les savons ; (iv) 10 ml d'acétone ont été ajoutés à la tasse pendant 10 min ; (v) 10 ml supplémentaires d'acétone ont été filtrés pour éliminer les matières lipophiles ; (vi) 0,5 à 1 ml de 0,01 mg ml-1 de Nile Red (qualité microscopie, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) a été ajouté à la tasse pendant 5 min ; (vii) 50 ml d'eau distillée ont été filtrés ; et (viii) stockés dans des boîtes de Pétri en verre conservées dans des boîtes en carton pendant une semaine pour sécher à température ambiante (20 °C).

Mesures de contrôle de la contamination Des mesures strictes de contrôle de la contamination ont été appliquées à toutes les phases, notamment par : (i) le port de blouses de laboratoire en coton et de gants propres ; (ii) travailler sous la hotte à flux laminaire dans une salle blanche, entretenu par un nettoyage à l'éthanol dans des serviettes en papier suivi d'un nettoyage avec un plumeau qui attire et piége les particules de poussière et les fibres de papier ; (iii) filtrer toutes les solutions (pores de 1,2 µm, Whatman® GF/C) ; (iv) l'utilisation de matériaux en verre et en métal ; (v) décontaminer les matériaux en verre en les immergeant dans 10 % de HNO3 pendant au moins 30 min et en les rinçant à l'eau distillée ; (vi) nettoyer en outre des boîtes de Pétri en verre avec un jet d'air N2 ; (vii) brûler des membranes filtrantes en microfibres de verre à 450 °C pendant 3 h ; (viii) nettoyer la coupelle du système de filtration entre les échantillons en la plongeant pendant 15 s dans une solution (premier lot : acétone, deuxième lot : 30 % HNO3) suivi d'un trempage dans de l'eau distillée ; (ix) garder les récipients d'échantillons fermés autant que possible avec des couvercles en verre, des bouchons ou du papier d'aluminium ; et (x) réaliser des blancs de procédure (solutions sans échantillons exposés aux procédures de préparation des échantillons) pour chaque lot. Chaque échantillon a été testé trois fois pour vérification. De plus, les microplastiques ont été évalués en psychologie sérique pour prévenir la contamination.