Микропластик при среднем отите с выпотным материалом

Данное исследование было запланировано проспективно. При наличии этического одобрения в исследование были включены пациенты, у которых наблюдалось двустороннее ОМЕ в течение как минимум трех месяцев или одностороннее ОМЕ в течение как минимум 9 месяцев. Пациенты с черепно-лицевыми аномалиями, расщелиной неба, ранее перенесшими операции на ухе, были исключены. Им были выполнены парацентез и внедрение вентиляционной трубки (ВТИ). От них и их родителей была получена форма информированного согласия.

Операция: Показания к хирургическому вмешательству определялись в зависимости от продолжительности заболевания и/или потери слуха. Больных оперировали под общим наркозом. Произведен парацентез из задненижнего квадранта барабанной перепонки. Глю-материал улавливался в аспирационной трубке и немедленно переносился в стеклянные пробирки (рис. 1). Для этого использовали стеклянный шприц и 0,9 % физиологическую сыворотку. Образцы отправлялись из правого и левого уха отдельно. Определение микропластика проводилось в лаборатории экологической инженерии инженерного факультета.

Метод определения микропластика: применяется в соответствии с Prada et. Аль отчет (11). Фрагменты, за исключением сгустков крови, промывали струей фильтрованной дистиллированной воды внутри ламинарного бокса для удаления любых поверхностных загрязнений, а все образцы взвешивали в закрытых стеклянных колбах с точностью до 0,1 мг (Sartorius, Entris, Германия). Был использован метод подготовки биологических образцов для окрашивания Нильским красным, ранее разработанный и протестированный [16]: (i) инкубация в течение 24 часов при 60 °C (инкубатор Oasis™ Benchtop IR CO2, Карон, Огайо, США) в 30 мл 10% КОН (мас./об., ≥85%, Labchem, Пенсильвания, США); (ii) через 24 часа температуру повышали до точки кипения и раствор немедленно фильтровали через мембрану из стекловолокна (1,2 поры мкм, Whatman® GF/C, Little Chalfont, Бакингемшир, Великобритания), установленные в вакуумной стеклянной системе фильтрации; (iii) 100 мл кипящей фильтрованной дистиллированной воды фильтровали для удаления мыл; (iv) в чашку добавляли 10 мл ацетона на 10 мин; (v) дополнительные 10 мл ацетона фильтровали для удаления липофильных веществ; (vi) в чашку на 5 минут добавляли 0,5-1 мл 0,01 мг/мл Nile Red (класса для микроскопии, Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США); (vii) отфильтровали 50 мл дистиллированной воды; и (viii) хранить в стеклянных чашках Петри в картонных коробках в течение недели для высыхания при комнатной температуре (20 °C).

Меры контроля загрязнения На всех этапах проводились строгие меры контроля загрязнения, а именно: (i) ношение хлопчатобумажных лабораторных халатов и чистых перчаток; (ii) работа в вытяжном шкафу с ламинарным потоком в чистом помещении с очисткой этанолом бумажными полотенцами с последующей очисткой тряпкой, которая притягивает и улавливает частицы пыли и бумажные волокна; (iii) фильтрование всех растворов (поры 1,2 мкм, Whatman® GF/C); (iv) использование стеклянных и металлических материалов; (v) обеззараживание стеклянных материалов путем погружения их в 10% HNO3 минимум на 30 минут и промывания дистиллированной водой; (vi) дополнительную очистку стеклянных чашек Петри струей воздуха N2; (vii) прожигание фильтрующих мембран из стеклянного микроволокна при 450 °C в течение 3 часов; (viii) очистка стакана системы фильтрации между пробами путем погружения его на 15 с в раствор (первая партия: ацетон, вторая партия: 30% HNO3) с последующим погружением в дистиллированную воду; (ix) держать контейнеры с пробами максимально закрытыми стеклянными крышками, колпаками или алюминиевой фольгой; и (x) проведение процедурных холостых проб (растворы без образцов, подвергнутых процедурам подготовки проб) для каждой партии. Каждый образец был протестирован трижды для проверки. Кроме того, микропластик оценивали в сыворотке крови для предотвращения загрязнения.