Mikroplast i mellomørebetennelse med effusjonsmateriale

Denne studien ble planlagt prospektivt. Med etisk godkjenning ble pasienter som ble fulgt av bilateral OME i minst tre måneder eller ensidig OME i minst 9 måneder registrert i studien. Pasienter med kraniofacial anomali, ganespalte, som tidligere har hatt øreoperasjoner, ble ekskludert. De ble operert som paracentese og ventilasjonsrørimplementering (VTI). Det ble innhentet et informert samtykkeskjema fra dem og deres foreldre.

Operasjon: Kirurgisk indikasjon ble gjort i henhold til sykdomsvarighet og/eller hørselstap. Pasientene ble operert under generell anestesi. Paracentese ble laget fra posteroinferior kvadrant av trommehinne. Glu-materiale ble fanget i sugerøret og overført til glassrør umiddelbart (figur 1). For dette ble glasssprøyte og 0,9 % serumfysiologisk brukt. Prøver ble sendt fra høyre og venstre øre separat. Mikroplastbestemmelse ble foretatt i miljøingeniørlaboratoriet ved Det ingeniørvitenskapelige fakultet.

Mikroplastbestemmelsesmetode: Den ble brukt i henhold til Prada et. al rapport (11). Fragmenter, bortsett fra blodpropper, ble vasket med en stråle av filtrert destillert vann inne i laminærstrømningshetten for å fjerne eventuell overflateforurensning, og alle prøver ble veid inne i lukkede glasskolber til nærmeste 0,1 mg (Sartorius, Entris, Tyskland). En metode for å forberede biologiske prøver for Nile Red-farging, tidligere utviklet og testet, ble fulgt [16]: (i) inkubasjon i 24 timer ved 60 °C (Oasis™ Benchtop IR CO2 Incubator, Caron, OH, USA) i 30 ml av 10 % KOH (vekt/volum, ≥85 %, Labchem, PA, USA); (ii) etter 24 timer ble temperaturen hevet til kokepunktet og løsningen ble umiddelbart filtrert på glassfiberfiltermembran (1.2) µm pore, Whatman® GF/C, Little Chalfont, Buckinghamshire, UK) montert i et vakuumglassfiltreringssystem; (iii) 100 ml kokende filtrert destillert vann ble filtrert for å fjerne såper; (iv) 10 ml aceton ble tilsatt til koppen i 10 minutter; (v) ytterligere 10 ml aceton ble filtrert for å fjerne lipofilt materiale; (vi) 0,5-1 ml 0,01 mg ml Nile Red (mikroskopikvalitet, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ble tilsatt til koppen i 5 minutter; (vii) 50 ml destillert vann ble filtrert; og (viii) lagret i petriskåler av glass holdt inne i pappesker i en uke for å tørke ved romtemperatur (20 °C).

Kontamineringskontrolltiltak Strenge forurensningskontrolltiltak ble utført i alle faser, nemlig ved: (i) bruk av bomullslaberfrakker og rene hansker; (ii) arbeid i den laminære strømningshetten i et rent rom, vedlikeholdt ved rengjøring med etanol i papirhåndklær etterfulgt av rengjøring med en støvsuger som tiltrekker og fanger støvpartikler og papirfibre; (iii) filtrering av alle løsninger (1,2 µm pore, Whatman® GF/C); (iv) bruk av glass og metallmaterialer; (v) dekontaminering av glassmaterialer ved å senke dem i 10 % HNO3 i minst 30 minutter og skylle med destillert vann; (vi) i tillegg rengjøring av petriskåler av glass med en N2 luftstråle; (vii) brenning av glassmikrofiberfiltermembraner ved 450 °C i 3 timer; (viii) rengjøring av koppen til filtreringssystemet mellom prøvene ved å dyppe den i 15 s i en løsning (første batch: aceton, andre batch: 30 % HNO3) etterfulgt av dypping i destillert vann; (ix) holde prøvebeholdere lukket så mye som mulig med glasslokk, korker eller aluminiumsfolie; og (x) utføre prosedyreblindprøver (løsninger uten prøver eksponert for prøveprepareringsprosedyrer) for hver batch. Hver prøve ble testet tre ganger for verifisering. I tillegg ble mikroplast evaluert i serumpsykologisk for å forhindre kontaminering.