Tidig erkännande och intervention hos syskon med hög risk för neuroutvecklingsstörning (ERI-SIBS)

Forskare kommer att kontakta intresserade föräldrar för att bedöma behörighet och ge detaljerad studieinformation. Föräldrar kommer att ge skriftligt samtycke innan de slutför baslinjebedömningar (T0) och baserat på poängen vid de viktigaste resultatmåtten kommer barn att tilldelas rätt grupp. Spädbarn utan tecken på oro och syskon till TD-barn kommer att tilldelas grupp 1 (CM); spädbarn utan tecken på oro (poäng på Griffiths-3 och CSBS-ITC i normalintervallet) och syskon till ASD-barn kommer att tilldelas grupp 2 (AM); Spädbarn med allmän kvotpoäng under 85 med Griffiths-3 och/eller minst en poäng över "bekymmersgränsen" med CSBS-ITC kommer att tilldelas grupp 3 (EI). Familjer som tilldelats grupp 2 och 3 kommer att påbörja interventionen inom en månad från grundbedömningen. Familjer som tilldelats grupp 1 kommer endast att utföra utvärderingarna vid olika tidpunkter. Bedömningar kommer att göras vid baslinjen (T0), vilket kommer att vara när föräldrarna ger sitt samtycke och inom 8 månader av barnets liv, efter 6 månader från starten av interventionen (T1) och efter 12 månader från starten av interventionen (T2).

Teknisk bedömning av socialt beteende och gemensam uppmärksamhet:

- videoinspelning av ESCP genom Kinect Azure-kamera för att samla in och analysera kvantitativ data relaterad till gemensam uppmärksamhet.

Administreringen av ECSP-I kommer att spelas in på video via en Azure Kinect-kamera för att automatiskt extrahera blickorientering och kvantitativt utvärdera Joint Attention.

- Eye-tracker förvärv Ett experimentellt Eye-Tracker Screening (ETS) protokoll för barn kommer också att utvecklas. Specifikt kommer korta videor att användas för att mäta barnens förmåga att bearbeta bekanta/obända ansikten och att svara på sociala stimuli, särskilt refererande blickar. Barnens ögonrörelser kommer att analyseras med eyetrackern (Tobii Pro Fusion) och extraheras med lämplig programvara.

Vid rekrytering (T0) kommer anamnestiska, sociodemografiska data och auxologiska och kliniska parametrar vid födseln att samlas in.

Biomolekylär bedömning Salivprover kommer att samlas in med hjälp av 3 olika kit, respektive för DNA- eller RNA-extraktion, och för proteindetektion, genom svampiga pinnar som sätts in i barnets mun, vilket leder salivinsamlingen icke-invasiv, enkel, snabb och viktigast av allt. , smärtfritt. Salivprover kommer att samlas in från alla proband (vid T0, T1 och T2) och från deras syskon och föräldrar vid T0 för att bedöma genetisk överföring från föräldrar till barn i förhållande till risken för ASD. Om möjligt kommer ett prov på cirka 40 ml blod (från föräldrarna) att samlas in.

Biologiska prover från familjekvartetten kommer att samlas in enligt följande:

1. I alla inskrivna barn, deras äldre syskon och föräldrar, kommer genetisk analys att utföras av en Next-Generation Sequencing (NGS) geninriktad panelmetod för att analysera gener involverade i synaptogenes och immunogenetisk reglering.
2. Epigenetisk analys av miRNome i saliv som samlats in från alla inskrivna barn vid alla tidpunkter kommer att utföras av NGS. Epigenetisk analys kommer att göra det möjligt att definiera en panel av mikroRNA som kan skilja mellan ASD-barn och barn med typisk utveckling.
3. Analys av inflammatoriska cytokiner och neurotrofiska faktorer med hjälp av ett automatiserat immunanalyssystem (ELLA, Biotech) kommer att utföras i proband vid T0, T1 och T2. Föräldrar kommer också att karakteriseras för cytokin- och lymfocytundergrupp vid T0.

Korrelationer mellan kliniska parametrar och alla biologiska variabler (genetiska, epigenetiska, inflammatoriska) kommer att utföras för att korrelera molekylära biomarkörer med neuroutvecklingsförändringar i uppföljning och pre-post intervention.

Provstorlek

Eftersom vikten av ECSP-I i detta projekt, som beteendemässiga resultatmått som ett verktyg för att nå kvantitativa data genom teknik, beräknar vi urvalsstorleken för att upptäcka ett samband mellan ECSP-I-poängen och grupperna (1, 2 och 3) vid varje tidpunkt. Beräkningen utfördes baserat på preliminära data (ej redan publicerade) från den italienska versionen av ESCP (ECSP-I). Om vi ​​antar en standardavvikelse på 0,56 för ECSP-I-skalan och en signifikansnivå α= 0,01, erhållen genom att tillämpa Bonferroni-korrigeringen för multipla jämförelser, utförda i par mellan grupper, till typ I-felet, fick vi en urvalsstorlek på 14 försökspersoner per grupp för att upptäcka en skillnad på 0,8 mellan medelvärdena för varje grupp med hjälp av ett tvåsidigt Students t-test för oberoende urval, med en styrka på 80 %. Om man antar en bortfallsfrekvens på 10 %, ökar den erforderliga urvalsstorleken till 16 försökspersoner per grupp, det vill säga totalt 48 försökspersoner.

Statistisk analys

Analys (med STATA eller SPSS 28.00) kommer att följa standardmetoder för försök med jämförelser mellan de tre grupperna. Först kommer en studie av spädbarnens mognadsbanor att genomföras, med en beskrivning av förändringarna före ingreppet i de utförda testerna. För det andra kommer kvantitativa utvärderingar av gemensamma uppmärksamhetsdata och molekylära markörer att utföras, detekteras och beskrivas genom medelvärde och standardavvikelse vid Gaussisk fördelning av variabler, eller median- och interkvartilintervall vid icke-Gaussisk fördelning. Normaliteten i fördelningarna kommer att bedömas genom att använda Shapiro-Wilk-testet. För kategoriska variabler kommer absoluta frekvenser och procentsatser att rapporteras. Genetisk analys av intrafamiliellt alleliskt arv kommer att utföras av AFBAC (Affected Family-Based Controls) och TDT (Transmission Disequilibrium Test). De immunologiska parametrarna som erhålls från grupperna av ASD-barn och barn med typisk utveckling kommer att analyseras med ett icke-parametriskt Mann-Whitney-test som gör det möjligt att identifiera specifika immunologiska biomarkörer för ASD-associerad neuroinflammation. Dessutom kommer kliniska parametrar att korreleras med immunologiska biomarkörer som är karakteristiska för ASD-barn. Slutligen kommer epigenetisk analys att tillåta oss att definiera en panel av mikroRNA som kan skilja mellan ASD-barn och barn med typisk utveckling. Med hjälp av datoralgoritmer kommer de potentiella målen, vägarna och biologiska funktioner som avregleras av denna grupp av miRNA att analyseras. Dessa data kommer också att analyseras avseende de kliniska parametrarna som utvärderats i studien och både den genetiska och inflammatoriska karaktäriseringen av de studerade försökspersonerna.