Tidlig anerkendelse og intervention hos søskende med høj risiko for neuroudviklingsforstyrrelse (ERI-SIBS)

Forskere vil kontakte interesserede forældre for at vurdere berettigelse og give detaljerede undersøgelsesoplysninger. Forældre vil give skriftligt samtykke, før de gennemfører baseline-vurderinger (T0), og baseret på scorene ved de vigtigste resultatmål, vil børn blive tildelt den korrekte gruppe. Spædbørn uden tegn på bekymring og søskende til TD-børn vil blive tildelt gruppe 1 (CM); spædbørn uden tegn på bekymring (score på Griffiths-3 og CSBS-ITC i normalområdet) og søskende til ASD-børn vil blive tildelt gruppe 2 (AM); spædbørn med generel kvotientscore under 85 ved brug af Griffiths-3 og/eller mindst én score over "bekymringsgrænsen" ved brug af CSBS-ITC vil blive tildelt gruppe 3 (EI). Familier, der er tildelt gruppe 2 og 3, vil påbegynde interventionen inden for en måned fra baseline-vurderingen. Familier tildelt gruppe 1 vil kun udføre evalueringerne på forskellige tidspunkter. Vurderinger vil blive gennemført ved baseline (T0), hvilket vil være, når forældrene giver deres samtykke og inden for de 8 måneder af barnets levetid, efter 6 måneder fra start af indsatsen (T1) og efter 12 måneder fra start af interventionen (T2).

Teknologisk vurdering af social adfærd og fælles opmærksomhed:

- videooptagelse af ESCP gennem Kinect Azure-kamera for at indsamle og analysere kvantitative data relateret til fælles opmærksomhed.

Administrationen af ​​ECSP-I vil blive videooptaget gennem et Azure Kinect-kamera for automatisk at udtrække blikretning og kvantitativt vurdere Joint Attention.

- Eye-tracker erhvervelser En eksperimentel Eye-Tracker Screening (ETS) protokol for børn vil også blive udviklet. Specifikt vil korte videoer blive brugt til at måle børns evne til at behandle kendte/ukendte ansigter og til at reagere på sociale stimuli, især referentielle blik. Børnenes øjenbevægelser vil blive analyseret ved hjælp af eye-tracker (Tobii Pro Fusion) og udtrukket ved hjælp af passende software.

Ved rekruttering (T0) vil der blive indsamlet anamnestiske, sociodemografiske data og auxologiske og kliniske parametre ved fødslen.

Biomolekylær vurdering Spytprøver vil blive indsamlet ved hjælp af 3 forskellige kits, henholdsvis til DNA- eller RNA-ekstraktion og til proteindetektion, gennem svampede podninger, der indsættes i barnets mund, hvilket fører spytopsamlingen ikke-invasiv, enkel, hurtig og vigtigst af alt. , smertefrit. Spytprøver vil blive indsamlet fra alle probands (ved T0, T1 og T2) og fra deres søskende og forældre ved T0 for at vurdere forældre-til-barn genetisk overførsel i forhold til risikoen for ASD. Hvis det er muligt, vil en prøve på cirka 40 ml blod (fra forældrene) blive indsamlet.

Biologiske prøver fra familiekvartetten vil blive indsamlet som følger:

1. I alle de tilmeldte børn, deres ældre søskende og forældre, vil genetisk analyse blive udført af en Next-Generation Sequencing (NGS) gen-målrettet paneltilgang til at analysere gener involveret i synaptogenese og immunogenetisk regulering.
2. Epigenetisk analyse af miRNome i spyt indsamlet fra alle tilmeldte børn på alle tidspunkter vil blive udført af NGS. Epigenetisk analyse vil gøre det muligt at definere et panel af mikroRNA'er, der kan skelne mellem ASD-børn og børn med typisk udvikling.
3. Analyse af inflammatoriske cytokiner og neurotrofiske faktorer ved hjælp af et automatiseret immunoassay-system (ELLA, Biotech) vil blive udført i probander ved T0, T1 og T2. Forældre vil også blive karakteriseret for cytokin og lymfocytundergruppe ved T0.

Korrelationer mellem kliniske parametre og alle biologiske variabler (genetiske, epigenetiske, inflammatoriske) vil blive udført for at korrelere molekylære biomarkører med neuroudviklingsmæssige ændringer i opfølgning og præ-post intervention.

Prøvestørrelse

Da vigtigheden af ​​ECSP-I i dette projekt, som adfærdsmæssige resultatmål som et værktøj til at nå kvantitative data gennem teknologi, beregner vi stikprøvestørrelsen for at påvise en sammenhæng mellem ECSP-I-score og grupperne (1, 2 og 3) på hvert tidspunkt. Beregningen blev udført på grundlag af foreløbige data (ikke allerede offentliggjort) fra den italienske version af ESCP (ECSP-I). Ved at antage en standardafvigelse på 0,56 for ECSP-I-skalaen og et signifikansniveau α= 0,01, opnået ved at anvende Bonferroni-korrektionen for multiple sammenligninger, udført i par mellem grupper, til type I-fejlen, opnåede vi en stikprøvestørrelse på 14 forsøgspersoner pr. gruppe for at detektere en forskel på 0,8 mellem gennemsnittet af hver gruppe ved hjælp af en 2-halet Student's t-test for uafhængige prøver med en styrke på 80%. Forudsat en frafaldsrate på 10 %, øges den nødvendige stikprøvestørrelse til 16 forsøgspersoner pr. gruppe, dvs. 48 forsøgspersoner i alt.

Statistisk analyse

Analyse (ved hjælp af STATA eller SPSS 28.00) vil følge standardmetoder for forsøg med sammenligninger mellem de tre grupper. Først vil der blive gennemført en undersøgelse af spædbørnenes modningsforløb med en beskrivelse af de præ-post interventionsændringer i de udførte tests. For det andet vil kvantitative evalueringer af fælles opmærksomhedsdata og molekylære markører blive udført, detekteret og beskrevet gennem middel- og standardafvigelse i tilfælde af Gaussisk fordeling af variable, eller median og interkvartilområde i tilfælde af ikke-Gaussisk fordeling. Normaliteten af ​​fordelinger vil blive vurderet ved at anvende Shapiro-Wilk-testen. For kategoriske variable vil absolutte frekvenser og procenter blive rapporteret. Genetisk analyse af intra-familiær allel arv vil blive udført af AFBAC (Affected Family-Based Controls) og TDT (Transmission Disequilibrium Test). De immunologiske parametre opnået fra grupperne af ASD-børn og børn med typisk udvikling vil blive analyseret ved hjælp af en ikke-parametrisk Mann-Whitney-test, der gør det muligt at identificere specifikke immunologiske biomarkører for ASD-associeret neuroinflammation. Desuden vil kliniske parametre blive korreleret med immunologiske biomarkører, der er karakteristiske for ASD-børn. Endelig vil epigenetisk analyse give os mulighed for at definere et panel af mikroRNA'er, der kan skelne mellem ASD-børn og børn med typisk udvikling. Ved hjælp af computeralgoritmer vil de potentielle mål, veje og biologiske funktioner dereguleret af denne gruppe af miRNA'er blive analyseret. Disse data vil også blive analyseret vedrørende de kliniske parametre, der er evalueret i undersøgelsen, og både den genetiske og inflammatoriske karakterisering af de undersøgte forsøgspersoner.