Korai felismerés és beavatkozás az idegfejlődési zavar magas kockázatának kitett testvéreknél (ERI-SIBS)

A kutatók kapcsolatba lépnek az érdeklődő szülőkkel, hogy felmérjék a jogosultságot, és részletes vizsgálati információkat nyújtsanak. A szülők írásos beleegyezését adják az alapszintű értékelések (T0) elvégzése előtt, és a fő eredménymérők pontszámai alapján a gyermekeket a megfelelő csoportba sorolják. Az aggodalomra utaló jeleket nem mutató csecsemők és a TD-gyermekek testvérei az 1. csoportba (CM) kerülnek besorolásra; aggodalomra okot adó csecsemők (a Griffiths-3 és a CSBS-ITC pontszámai a normál tartományban) és az ASD-s gyermekek testvérei a 2. csoportba (AM) kerülnek besorolásra; azok a csecsemők, akiknek az általános hányados pontszáma 85 alatt van a Griffiths-3 használatával és/vagy legalább egy ponttal meghaladja az „aggodalomra okot adó” határértéket a CSBS-ITC használatával, a 3. csoportba (EI) kerül besorolásra. A 2. és 3. csoportba besorolt ​​családok az alapállapot értékelésétől számított egy hónapon belül kezdik meg a beavatkozást. Az 1. csoportba besorolt ​​családok csak az értékeléseket végzik el különböző időpontokban. Az értékelésre a kiindulási állapot (T0) időpontjában kerül sor, amikor a szülők beleegyezését adják, és a gyermek életének 8 hónapon belül, a beavatkozás kezdetétől számított 6 hónap elteltével (T1) és a beavatkozás kezdetétől számított 12 hónap elteltével. a beavatkozás (T2).

A szociális viselkedés és a közös figyelem technológiai értékelése:

- ESCP videorögzítése a Kinect Azure kamerán keresztül a közös figyelemhez kapcsolódó mennyiségi adatok gyűjtéséhez és elemzéséhez.

Az ECSP-I adminisztrációját az Azure Kinect kamerán keresztül rögzítik, hogy automatikusan kivonják a tekintet tájolását és mennyiségileg értékeljék a közös figyelem mértékét.

- Eye-tracker beszerzések Egy kísérleti Eye-Tracker Screening (ETS) protokollt is kidolgoznak gyermekek számára. Konkrétan, rövid videókat használnak annak mérésére, hogy a gyerekek mennyire képesek feldolgozni az ismerős/ismeretlen arcokat, és reagálni a társadalmi ingerekre, különösen a referencia tekintetre. A gyerekek szemmozgását a szemkövető (Tobii Pro Fusion) segítségével elemzik, és a megfelelő szoftverrel kivonják.

A toborzáskor (T0) anamnesztikus, szociodemográfiai adatokat, valamint születéskor auxológiai és klinikai paramétereket gyűjtenek.

Biomolekuláris értékelés A nyálmintákat 3 különböző készlettel gyűjtik DNS- vagy RNS-kivonáshoz, illetve fehérje-detektáláshoz, szivacsos tamponok segítségével, amelyeket a baba szájába helyeznek, így a nyálgyűjtés nem invazív, egyszerű, gyors és ami a legfontosabb. , fájdalommentes. Nyálmintákat gyűjtenek az összes szondától (T0, T1 és T2 időpontban), valamint testvéreiktől és szüleiktől T0-ban, hogy felmérjék a szülőről gyermekre való genetikai átvitelt az ASD kockázatával összefüggésben. Ha lehetséges, körülbelül 40 ml vérmintát veszünk (a szülőktől).

A családi kvartett biológiai mintáit az alábbiak szerint gyűjtik:

1. Az összes beiratkozott gyermeknél, idősebb testvéreiknél és szüleiknél a genetikai elemzést a következő generációs szekvenálás (NGS) gén-célzott panel-megközelítésével végzik el a szinaptogenezisben és az immunogenetikai szabályozásban részt vevő gének elemzésére.
2. Az összes beiratkozott gyermektől minden időpontban összegyűjtött nyálban lévő miRNome epigenetikai elemzését az NGS végzi el. Az epigenetikai elemzés lehetővé teszi egy olyan mikroRNS-panel meghatározását, amely megkülönbözteti az ASD-s gyermekeket a tipikus fejlődésű gyermekektől.
3. A gyulladásos citokinek és a neurotróf faktorok elemzése automatizált immunoassay rendszerrel (ELLA, Biotech) történik a T0, T1 és T2 próbákon. A szülőket a citokin- és limfocita-alcsoportra is jellemzik a T0-nál.

A klinikai paraméterek és az összes biológiai változó (genetikai, epigenetikai, gyulladásos) közötti összefüggéseket elvégzik, hogy a molekuláris biomarkereket korrelálják az idegrendszeri fejlődési változásokkal a nyomon követés és a pre-post beavatkozás során.

Minta nagysága

Mivel az ECSP-I fontos ebben a projektben, mint a viselkedési kimenetel mércéje, mint a kvantitatív adatok technológián keresztüli elérésének eszköze, kiszámítjuk a minta méretét, hogy észleljük az ECSP-I pontszám és a csoportok közötti összefüggést (1, 2 és 3). minden időpontban. A számítást az ESCP olasz verziójának (ECSP-I) előzetes (még nem publikált) adatai alapján végeztük. Az ECSP-I skála 0,56-os szórását és α= 0,01 szignifikanciaszintet feltételezve, amelyet a Bonferroni-korrekció többszörös összehasonlítására, a csoportok közötti párokban végrehajtott alkalmazásával kaptunk az I. típusú hibára, a minta mérete: 14 alany csoportonként, hogy az egyes csoportok átlagai között 0,8-as különbséget detektáljunk a független minták kétvégű Student-féle t-próbája segítségével, 80%-os hatványon. 10%-os lemorzsolódást feltételezve a szükséges mintanagyság csoportonként 16 alanyra nő, azaz összesen 48 alany.

Statisztikai analízis

Az analízis (STATA vagy SPSS 28.00 használatával) a standard kísérleti módszereket követi a három csoport összehasonlításával. Először a csecsemők érési pályáinak tanulmányozására kerül sor, az elvégzett vizsgálatokban a beavatkozás előtti változások leírásával. Másodszor, a közös figyelemadatok és molekuláris markerek kvantitatív kiértékelését végezzük el, detektáljuk és leírjuk átlaggal és szórással a változók Gauss-eloszlása ​​esetén, illetve medián és interkvartilis tartományban nem Gauss-eloszlás esetén. Az eloszlások normálisságát a Shapiro-Wilk teszt alkalmazásával értékeljük. A kategorikus változók esetében az abszolút gyakoriságokat és százalékokat kell jelenteni. A családon belüli allél öröklődés genetikai elemzését az AFBAC (Érintett családalapú kontrollok) és a TDT (Transmission Disequilibrium Test) segítségével végzik el. Az ASD és a tipikus fejlődésű gyermekek csoportjaiból nyert immunológiai paramétereket nem-paraméteres Mann-Whitney teszttel elemezzük, amely lehetővé teszi az ASD-vel összefüggő neurogyulladás specifikus immunológiai biomarkereinek azonosítását. Ezenkívül a klinikai paraméterek korrelációba kerülnek az ASD-s gyermekekre jellemző immunológiai biomarkerekkel. Végül, az epigenetikai elemzés lehetővé teszi számunkra, hogy meghatározzuk a mikroRNS-ek paneljét, amely megkülönbözteti az ASD-s gyermekeket a tipikus fejlődésű gyermekektől. Számítógépes algoritmusok segítségével elemzik a miRNS-ek ezen csoportja által deregulált lehetséges célpontokat, útvonalakat és biológiai funkciókat. Ezeket az adatokat a vizsgálat során értékelt klinikai paraméterek, valamint a vizsgált alanyok genetikai és gyulladásos jellemzése tekintetében is elemezni fogják.