不同基台材料周围的种植体周围软组织

牙科植入物通过骨骼和植入物之间的直接结合固定在颚骨中。 然而，植入物的成功和存活并不仅仅取决于骨整合。 围绕牙种植体跨粘膜部分的软组织将种植体周围骨与口腔分开。 这种软组织环称为“种植体周围粘膜”。 附着在种植体表面的软组织起到生物密封的作用，可防止炎症性种植体周围疾病（即种植体周围疾病）的发展。 种植体周围粘膜炎和种植体周围炎）因此，种植体周围的软组织密封可确保健康状况和稳定的骨整合，从而确保种植体的长期存活。 虽然牙齿周围的软组织密封在牙齿萌出过程中形成，但种植体周围粘膜是在为插入种植体而产生的手术伤口之后形成的。 伤口愈合阶段可能发生在植入物颈部周围的粘骨膜瓣关闭后，即所谓的一期手术或在对已安装的牙种植体进行基台连接的第二次手术干预后（两期手术） ).

软组织粘附似乎受到与软组织接触的种植体组件的特性（基台材料和微形貌）的影响。 基台材料被发现也会影响种植体周围软组织的探诊出血 (BoP)。

由于伤口愈合发生在关键区域存在生物材料（即异物）的情况下，因此必须考虑伤口愈合事件对该生物材料的积极或消极干扰以及软组织对该生物材料的适应性。 生物相容性、软组织粘附、牙菌斑保留、机械性能和美学被列在材料基台选择的标准中。 鉴于钛的机械阻力、生物相容性、增加细胞粘附和斑块保留的表面改性，钛仍然是最可靠的材料。 然而，在美学需求增加的情况下，特别是对于薄型生物型，氧化锆和陶瓷铝基台可提供更好的结果，其技术和生物学结果可与钛基台相媲美。

聚醚醚酮 (PEEK) 是一种由聚醚醚酮树脂制成的高强度热塑性材料。 由于具有较高的机械强度和耐用性、良好的电气特性和突出的耐水解性，PEEK已广泛应用于航空航天、汽车、化工、电子、石油和食品饮料等行业。 最近，开发了一种医用级 PEEK。 医用级PEEK具有与PEEK相同的物理性能；然而，PEEK-OPTIMA™ 还具有生物相容性，具有高耐化学性和耐受多种不同的灭菌方法。 值得一提的是，PEEK 的弹性模量与骨骼的弹性模量相似，可防止在咬合超载的情况下发生边缘骨丢失。 由于上述特性，PEEK 已被用作基台材料。

基台的形态也值得考虑。 当在软组织旁边选择不同的出现轮廓（最常见）时，可以在种植体修复周围及时看到一些生理性软组织衰退。 最近已经表明，使用锥形出现轮廓基台可以看到一些牙龈冠状迁移。 事实上，通过在颈部种植体水平（跨粘膜水平）使用这些锥形基台或具有锥形形状的种植体设计，随着时间的推移，不仅可以实现软组织迁移，还可以实现硬组织迁移。

种植体周围粘膜愈合的特点是血管结构的快速形成和炎症细胞的募集，随后是组织的成熟，最终建立了上牙槽骨结缔组织和长连接上皮的牢固屏障，从而有效地防止细菌生物膜的向下生长. 血管生成作为伤口愈合的关键部分，被发现在 2 周时达到峰值，并在 10 周内下降，而炎症细胞（B 细胞和 T 细胞）的募集发生在集群中，并在结缔组织愈合后 4 至 8 周减少.

然而，很少有关于可能决定种植体周围软组织组织学组织的早期反应以及与不同宏观和微观修饰材料接触的信息。 种植体周围软组织是牙龈和口腔粘膜的一部分，种植体植入是通过创口进行的。 肌成纤维细胞是损伤后结缔组织生理重建和产生表征纤维化的病理组织变形的关键参与者。 它们构成了 I 型胶原蛋白的重要细胞来源，这在伤口愈合过程中是必不可少的。 肌成纤维细胞过度收缩和过量产生细胞外基质，主要是胶原蛋白，可导致组织纤维化，形成以抗张强度降低和胶原纤维定向紊乱为特征的增生性瘢痕。 在全层皮肤伤口中，肌成纤维细胞分化在受伤后大约一周开始，收缩在受伤后 5-15 天达到峰值，但在口腔中，这一步骤发生得比皮肤早，因为这些组织的愈合时间较短。

因此，本研究的目的是评估植入后 24 小时不同愈合基台材料（钛 gr4、钛 gr 5、锆和 PEEK）的种植体周围粘膜组织的肌成纤维细胞成分。

材料和方法 伦理方面 本协议将在部门批准后由罗马第一大学伦理委员会进行评估。 将向每位患者提供书面知情同意书。

研究设计 对四种不同材料（钛 gr4、钛 gr 5、锆和 PEEK）植入和愈合基台放置后 24 小时从种植体周围软组织获取的活组织检查进行生物分子研究。

操作员、失明和分配 种植体和基台将由一名操作员放置，在研究期间不参与其他功能。 不参与种植体或基台放置的第二名操作员将执行活组织检查。 实验室操作员将不知道活组织检查的分配。 与每个种植体相关的基台类型将在一个封闭的信封中确定，该信封只有在植入种植体时才会打开。 患者将被告知所使用的植入物和基台的类型，但不会被告知每个植入物和基台的确切位置。

样本特征 在罗马第一大学牙科诊所招募的 10 名种植体治疗患者将在满足纳入和排除标准后参与研究。

纳入标准：

(I) 年龄 ≥ 18 岁 (II) 无全身性疾病/紊乱 (III) 每天吸烟 ≤ 5 支 (IV) 牙周健康或接受过治疗 (V) 全口菌斑评分 (FMPS) 基线时≤ 15% (VI) ) 基线时全口出血评分 (FMBS) ≤ 15% (VII) 存在需要全对四或全对六覆盖义齿治疗的缺牙区 (VIII) 牙槽嵴角化牙龈宽度 ≥ 2

排除标准：（排除风险/混杂因素）：

(I) 怀孕/哺乳期 (II) 在过去 3 个月内使用过全身性抗生素 (III) 使用全身性抗生素预防心内膜炎 (IV) 长期接受已知会影响牙周组织的药物治疗的患者（即 2 周或更长时间） （例如。 苯妥英钠、钙拮抗剂、环孢菌素、华法林和非甾体类抗炎药）开始研究前的最后一个月 (V) 颈部头部区域的放射治疗 (VI) HIV、结核病、肝炎或其他传染病 (VII) 滥用使用药物或酒精 (VIII) 吸烟 > 每天 5 支香烟 (IX) 未经治疗的牙周炎 (X) FMPS > 基线时 15% (XI) FMBS > 基线时 15% (XII) 种植体有种植体周围病史 (XIII) 宽度嵴上的角化组织 <2 mm (XIV) 需要在植入物周围进行骨重建

临床治疗

该协议将遵循 Tomasi 等人 2014 年对在切开准备皮瓣时采集的基线样本进行修改。 简而言之，在局部麻醉、皮瓣抬高和种植体植入（瑞典和 Martina SpA，意大利帕多瓦）之后，一个由四种不同材料（tigran gr4、tigran gr 5、锆和 PEEK）制成的特别设计的基台将连接到每个种植体双盲分配和缝合皮瓣。 患者将用氯己定冲洗 1 周，直至拆线。 种植体植入 24 小时后，将使用定制切割装置对种植体周围软组织进行环状活检。 将一个导销连接到基台，一个带有切削刃的圆形冲头将在基台周围被压向顶端，切开一个 1.5 毫米厚的种植体周围软组织环，并将其连同基台和切割装置一起移除。 将整个系统置于 4% 福尔马林中，48 小时后转移到 70% 乙醇溶液中。

细胞组织学分析

细胞免疫荧光染色和共聚焦显微镜。 一旦用围绕植入物颈部的打孔器收获细胞，就可以使用外植体方法获得细胞。 首先将 2 mm 样品切碎，然后放入培养瓶中，并在 37°C、5% CO2 的完全培养基中孵育。 或者，将样品置于补充有 15% FBS 和抗生素的高葡萄糖 DMEM 中，并在 4°C 下储存 24 小时。 然后在室温下将细胞固定在 PBS 中的 4% PFA 中 30 分钟。 为了标记感兴趣的分子，细胞在 PBS/10% 山羊血清/0.3% 中透化 Triton X-100（1 小时，20°C），然后是 PBS/0.1% BSA/0.3% Triton X-100（4°C，20°C）中的一抗（针对细胞骨架/细胞骨架相关蛋白和基质蛋白），洗涤，并与二抗、DAPI 和/或鬼笔环肽一起孵育（4°C、20°C）。 使用 20x/0.50 NA 和 40x/0.80 NA 物镜（Olympus FV1000）进行共聚焦荧光（Leica SP8）和落射荧光显微镜（DeltaVision 系统）。

活检组织显微镜检查。 手术切除后获得的组织样本固定在福尔马林中，并用振动切片机（Leica，VT100s）切片以获得 200 μm 厚的切片。 为了优化抗体渗透，对每个一抗和二抗孵育和洗涤步骤（PBS/2% 山羊血清/0.1% Triton X-100/0.05%）执行顺序 24 小时孵育 (4°C) NaN3). 使用具有 20x /NA 0.95 物镜（Olympus XLUMPlanFI 206）和 910/1090/1180 nm 激发的双光子显微镜获取图像。

统计分析

在种植体植入时和植入后 24 小时内总共采集 80 个样本，每个样本分析 3 次。 结果将表示为平均值和 SD 值以及来自适当软件（STATA 13.1 版；StataCorp LP；College Station, TX）的 ANOVA 和 Mann-Whitney 测试，用于找出四种基台材料之间的差异