Imunoskóre jako prognostický marker pro pacienty s kolorektálním karcinomem (IMMUCOL)

Hlavním cílem je posouzení vlivu imunoskóre v klinické praxi. Za tímto účelem bude prospektivně hodnocen imunitní parametr (CD3, CD8, CD45RO) kolorektálních karcinomů (stadium I-IV) prostřednictvím velké multicentrické studie. Zařazeno bude 400 pacientů s CRC stadia I až IV (6 center pro zařazení; Paris-HEGP, Dijon, Bobigny-Avicenne, Besancon, Poitiers, Rouen). Počet pacientů, kteří mají být zařazeni, byl vypočítán na základě doby zařazení 24 měsíců, sledování 3 roky (sběr dat v průběhu 4. a 5. roku je plánován se spolufinancováním), předpokládané četnost příhod 20 %, prognostická hodnota imunitního parametru podobná té, která byla pozorována v retrospektivní studii 399 pacientů s CRC (*1) a síla testu 90 %. Během počátečního managementu i následného sledování budou registrovány všechny terapeutické postupy (chirurgie, radioterapie, chemoterapie…). Data budou shromažďována z klinických vyšetření, radiologických vyšetření a biologických testů, které se obvykle provádějí během hospitalizace pro kolorektální karcinom: Úplné klinické vyšetření a dotazování na přítomnost CRC, adenomů a jiných rakovin v osobní a rodinné anamnéze; Ultrazvuk břicha, RTG hrudníku; Počítačová tomografie (CT) a magnetická rezonance (MRI) dle požadavků lékaře; Standardní laboratorní testy a krevní test na karcinoembryonální antigen (CEA); Histopatologická studie nádoru obsahující stav okrajů chirurgické excize, histologický typ rakoviny, úroveň parietální invaze, počet vyšetřených lymfatických uzlin a počet metastatických lymfatických uzlin podle TNM klasifikace. Pacienti budou sledováni každé 3 měsíce během prvních 2 let a každých 6 měsíců po zbytek období sledování podle doporučení. Každý pacient bude sledován po dobu 5 let. Klinická, biologická a radiologická data budou registrována do specifického CRF. Ověření inkluzí a monitorování dat bude provádět HEGP Clinical Research Unit (URC HEGP) a hlavní zkoušející. V souladu s monitorováním bude vytvořen plán pro správu dat. Pacientům bude také každých šest měsíců po dobu pěti let zasílán dotazník. Tento dotazník sestavil Pr F Pagès a psychologové a psychiatři za účelem vyhledávání informací týkajících se (i) přítomnosti poruchy imunity (jako je alergie, autoimunita, zánětlivý proces) a (ii) psychického stavu pacientů (např. Deprese). Po monitorování budou všechna data uložena pomocí systému dvojího zadávání dat v databázi MS-Access navržené URC-HEGP a v databázi TME.dB vytvořené týmem hlavního řešitele. Obě databáze budou sloučeny a konečná databáze bude zmrazena pro statistickou analýzu. Příprava vzorku: Patolog každého centra vybere nádorový blok obsahující jádro nádoru a invazivní okraj. Tento nádorový blok je součástí vzorků nádorů rutinně zpracovávaných oddělením patologie k diagnostice. budou vyrobeny tři tkáňové řezy o velikosti 4 mikrony a uloženy na podložní sklíčko pro provedení imunohistochemie. Pro provedení genetických analýz budou vyrobeny čtyři tkáňové řezy o velikosti 4 mikrony a uloženy na zkumavky Eppendorf safe lock. Anonymní jména pacientů na sklíčkách a zkumavkách budou uvedena pomocí číselného kódu a iniciál pacienta. Pokud jsou k dispozici biopsie pro diagnostické účely (tj. ty provedené u pacientů během jejich počáteční hospitalizace (50 % případů), budou provedeny tkáňové řezy každé biopsie. Všechna sklíčka a zkumavky budou zaslány poštou na platformu HEGP pro analýzu imunitního infiltrátu a na oddělení biologie pro genetické analýzy. Imunoskóre bude stanoveno pomocí následujících kroků: Imunobarvení pro CD3, CD8, CD45RO na automatu Benchmark XT; Skenování imunobarvení na skeneru Hamamatsu: Kvantifikace imunitních populací ve specifických oblastech nádoru (jádro a invazivní okraj) pomocí speciálního modulu analýzy obrazu založeného na rozpoznání histologických struktur přizpůsobených kolorektálnímu karcinomu. Tento modul vyvinula naše skupina ve spojení se společností Definiens. Poloautomatický postup umožňuje kvantifikaci obarvených buněk v každé oblasti nádoru. Každá oblast je rozdělena na dlaždice o straně 800 mikronů (500 až 700 dlaždic analyzovaných na nádor). Hustota každého markeru se vypočítá pomocí průměrné hustoty tří dlaždic nejvíce infiltrovaných v každé oblasti nádoru. Bude provedena kategorizace na vysokou hustotu (Hi) nebo nízkou (Lo) pro každý marker v každé oblasti zájmu nádoru. Tato kategorizace se provádí porovnáním pozorované hustoty s optimální mezní hustotou (přístup s hodnotou min p), kterou jsme dříve určili pro DFS a OS v retrospektivní studii 250 CRC. Genetické analýzy: Zkumavky obsahující sekce pro genetické analýzy pacientů s informovaným souhlasem podepsaným ke genetickému vyšetření budou předány na oddělení biologie Hôpital Européen Georges Pompidou. % nádorových buněk každého vzorku určí patolog (na základě hodnocení H&E; méně než 10 %, 10–20 %, 20–50 %, až 50 % nádorových buněk) a provede se extrakce DNA . Genetické vyšetření bude zahrnovat stav MSI, přítomnost mutace K-Ras a BRAF