L'Immunoscore comme marqueur pronostique pour les patients atteints d'un cancer colorectal (IMMUCOL)

L'objectif principal est d'évaluer l'impact de l'immunoscore dans la pratique clinique. À cette fin, le paramètre immunitaire (CD3, CD8, CD45RO) des cancers colorectaux (stade I-IV) sera évalué de manière prospective à travers une vaste étude multicentrique. 400 patients atteints de CCR de stade I à IV seront inclus (6 centres à l'inclusion ; Paris-HEGP, Dijon, Bobigny-Avicenne, Besançon, Poitiers, Rouen). Le nombre de patients à inclure a été calculé sur la base d'une période d'inclusion de 24 mois, d'un suivi de 3 ans (un recueil de données en 4ème et 5ème année est prévu avec un cofinancement), d'un taux d'événements de 20 %, une valeur pronostique du paramètre immunitaire similaire à celle observée dans l'étude rétrospective de 399 patients atteints de CCR (*1) et une puissance du test de 90 %. Lors de la prise en charge initiale comme du suivi, tous les gestes thérapeutiques seront enregistrés (chirurgie, radiothérapie, chimiothérapie…). Les données seront recueillies à partir de l'examen clinique, des examens radiologiques et des tests biologiques qui sont habituellement pratiqués lors d'une hospitalisation pour cancer colorectal : Examen clinique complet et interrogation sur la présence d'antécédents personnels et familiaux de CCR, d'adénomes et d'autres cancers ; Échographie abdominale, radiographie pulmonaire ; Tomodensitométrie (TDM) et imagerie par résonance magnétique (IRM) selon les exigences du clinicien ; Tests de laboratoire standard et dosage sanguin de l'antigène carcinoembryonnaire (CEA); L'étude histopathologique de la tumeur contenant l'état des marges d'exérèse chirurgicale, le type histologique du cancer, le niveau d'envahissement pariétal, le nombre de ganglions examinés et le nombre de ganglions métastatiques, selon la classification TNM. Les patients seront suivis tous les 3 mois pendant les 2 premières années, et tous les 6 mois pendant le reste de la période de suivi, comme recommandé. Chaque patient sera suivi jusqu'à 5 ans. Les données cliniques, biologiques et radiologiques seront enregistrées dans un CRF spécifique. La vérification des inclusions et le suivi des données seront effectués par l'Unité de Recherche Clinique de l'HEGP (URC HEGP) et l'investigateur principal. Un plan de gestion des données sera élaboré en lien avec le suivi. Un questionnaire sera également envoyé aux patients tous les six mois pendant cinq ans. Ce questionnaire a été construit par le Pr F Pagès et par des psychologues et psychiatres pour rechercher des informations concernant (i) la présence d'un trouble immunitaire (tel qu'allergie, auto-immunité, processus inflammatoire) et (ii) l'état psychologique des patients (ex. dépression). Après le suivi, toutes les données seront stockées à l'aide d'un système de double saisie dans une base de données MS-Access conçue par l'URC-HEGP et dans la base de données TME.dB créée par l'équipe de l'investigateur principal. Les 2 bases de données seront fusionnées et la base de données finale sera gelée pour l'analyse statistique. Préparation des échantillons : Le pathologiste de chaque centre choisira un bloc tumoral contenant le noyau de la tumeur et la marge invasive. Ce bloc tumoral fait partie des prélèvements tumoraux traités en routine par le département de Pathologie pour le diagnostic. trois coupes de tissus de 4 microns seront réalisées et déposées sur une lame de verre pour réaliser l'immunohistochimie. Quatre coupes de tissus de 4 microns seront réalisées et déposées sur un tube Eppendorf safe lock pour effectuer les analyses génétiques. Les noms anonymes des patients sur les lames et les tubes seront fournis en utilisant un numéro de code et les initiales du patient. Si des biopsies à des fins de diagnostic sont disponibles (c. celles pratiquées pour les patients lors de leur hospitalisation initiale (50% des cas), Une coupe tissulaire de chaque biopsie sera réalisée. Toutes les lames et tous les tubes seront envoyés par courrier à la plateforme de l'HEGP pour l'analyse de l'infiltrat immunitaire et au service Biologie pour les analyses génétiques. L'immunoscore sera déterminé en suivant les étapes suivantes : immunomarquages ​​pour CD3, CD8, CD45RO sur l'automate Benchmark XT ; Numérisation des immunomarquages ​​sur scanner Hamamatsu : Quantification des populations immunitaires dans des zones tumorales spécifiques (le noyau et la marge invasive) avec un module d'analyse d'images dédié basé sur la reconnaissance de structures histologiques adaptées au cancer colorectal. Ce module a été développé par notre groupe en lien avec la société Definiens. Une procédure semi-automatique permet la quantification des cellules colorées dans chaque région tumorale. Chaque région est découpée en tuiles de 800 microns de côté (500 à 700 tuiles analysées par tumeur). La densité de chaque marqueur est calculée à partir de la densité moyenne des trois tuiles les plus infiltrées dans chaque région tumorale. Une catégorisation en haute densité (Hi) ou basse (Lo) pour chaque marqueur dans chaque région tumorale d'intérêt sera effectuée. Cette catégorisation est effectuée en comparant la densité observée avec la densité de coupure optimale (approche min p value) que nous avons précédemment déterminée pour la DFS et l'OS dans une étude rétrospective de 250 CRC. Analyses génétiques : Les tubes contenant les coupes pour les analyses génétiques des patients avec consentement éclairé signé pour l'investigation génétique seront transférés au Service de Biologie, Hôpital Européen Georges Pompidou. Le % de cellules tumorales de chaque échantillon sera déterminé par un pathologiste (sur la base d'une évaluation H&E ; moins de 10 %, 10-20 %, 20-50 %, jusqu'à 50 % de cellules tumorales) et l'extraction d'ADN sera effectuée . L'investigation génétique comprendra le statut MSI, la présence d'une mutation K-Ras et BRAF