El Immunoscore como marcador pronóstico para pacientes con cáncer colorrectal (IMMUCOL)

El objetivo principal es evaluar el impacto del immunoscore en la práctica clínica. Para ello, se evaluará prospectivamente el parámetro inmunitario (CD3, CD8, CD45RO) de los cánceres colorrectales (estadio I-IV) a través de un gran estudio multicéntrico. Se incluirán 400 pacientes con CCR estadio I a IV (6 centros para la inclusión; Paris-HEGP, Dijon, Bobigny-Avicenne, Besancon, Poitiers, Rouen). El número de pacientes a incluir se ha calculado en base a un periodo de inclusión de 24 meses, un seguimiento de 3 años (se prevé una recogida de datos durante el 4º y 5º año con una cofinanciación), una previsión tasa de eventos del 20%, un valor pronóstico del parámetro inmunológico similar al observado en el estudio retrospectivo de 399 pacientes con CCR (*1) y una potencia de la prueba del 90%. Tanto durante el manejo inicial como durante el seguimiento, se registrarán todos los procedimientos terapéuticos (cirugía, radioterapia, quimioterapia…). Se recopilarán datos del examen clínico, exámenes radiológicos y pruebas biológicas que se realizan habitualmente durante una hospitalización por cáncer colorrectal: Examen clínico completo e interrogatorio sobre la presencia de antecedentes personales y familiares de CCR, adenomas y otros cánceres; Ecografía abdominal, radiografía de tórax; Tomografía computarizada (TC) y resonancia magnética nuclear (RMN) según requerimiento del médico; Pruebas de laboratorio estándar y análisis de sangre para antígeno carcinoembrionario (CEA); El estudio Histopatológico del tumor que contiene el estado de los márgenes de escisión quirúrgica, el tipo histológico de cáncer, el nivel de invasión parietal, el número de ganglios examinados y el número de ganglios metastásicos, según la clasificación TNM. Los pacientes serán controlados cada 3 meses durante los 2 primeros años, y cada 6 meses el resto del seguimiento, según recomendación. Cada paciente será seguido hasta 5 años. Los datos clínicos, biológicos y radiológicos se registrarán en un CRF específico. La verificación de las inclusiones y el seguimiento de los datos serán realizados por la Unidad de Investigación Clínica HEGP (URC HEGP) y el investigador principal. Se construirá un plan para la gestión de datos en línea con el monitoreo. También se enviará un cuestionario a los pacientes cada seis meses durante cinco años. Este cuestionario fue construido por Pr F Pagès y por psicólogos y psiquiatras para buscar información sobre (i) la presencia de un trastorno inmunológico (como alergia, autoinmunidad, proceso inflamatorio) y (ii) el estado psicológico de los pacientes (p. depresión). Tras el seguimiento, todos los datos se almacenarán mediante un sistema de doble entrada de datos en una base de datos MS-Access diseñada por la URC-HEGP y en la base de datos TME.dB creada por el equipo del investigador principal. Las 2 bases de datos se fusionarán y la base de datos final se congelará para el análisis estadístico. Preparación de la muestra: El patólogo de cada centro elegirá un bloque tumoral que contenga el núcleo del tumor y el margen invasivo. Este bloque tumoral forma parte de las muestras tumorales que procesa rutinariamente el departamento de Patología para su diagnóstico. Se realizarán tres secciones de tejido de 4 micras y se depositarán en un portaobjetos de vidrio para realizar la inmunohistoquímica. Se realizarán cuatro secciones de tejido de 4 micras y se depositarán en tubos Eppendorf safe lock para realizar los análisis genéticos. Los nombres anónimos de los pacientes en los portaobjetos y los tubos se proporcionarán mediante un número de código y las iniciales del paciente. Si se dispone de biopsias con fines de diagnóstico (es decir, las realizadas a los pacientes durante su hospitalización inicial (50% de los casos), Se realizarán cortes de tejido de cada biopsia. Todos los portaobjetos y tubos se enviarán por correo a la plataforma HEGP para el análisis del infiltrado inmune y al departamento de Biología para los análisis genéticos. La inmunopuntuación se determinará mediante los siguientes pasos: inmunotinciones para CD3, CD8, CD45RO en Benchmark XT automatizado; Escaneo de las inmunotinciones en el escáner Hamamatsu: Cuantificación de las poblaciones inmunes en áreas tumorales específicas (el núcleo y el margen invasivo) con un módulo de análisis de imágenes dedicado basado en el reconocimiento de estructuras histológicas adaptadas al cáncer colorrectal. Este módulo ha sido desarrollado por nuestro grupo en colaboración con la empresa Definiens. Un procedimiento semiautomático permite la cuantificación de células teñidas en cada región tumoral. Cada región se divide en mosaicos de 800 micras de lado (500 a 700 mosaicos analizados por tumor). La densidad de cada marcador se calcula utilizando la densidad media de los tres mosaicos más infiltrados en cada región tumoral. Se realizará una categorización en alta densidad (Hi) o baja (Lo) para cada marcador en cada región tumoral de interés. Esta categorización se realiza comparando la densidad observada con la densidad de corte óptima (enfoque del valor p mínimo) que determinamos previamente para la DFS y OS en un estudio retrospectivo de 250 CRC. Análisis genéticos: Los tubos que contienen las secciones para los análisis genéticos de pacientes con consentimiento informado firmado para investigación genética serán transferidos al Departamento de Biología, Hôpital Européen Georges Pompidou. El % de células tumorales de cada muestra lo determinará un patólogo (basado en una evaluación de H&E; menos del 10 %, 10-20 %, 20-50 %, hasta 50 % de células tumorales) y se realizará la extracción de ADN. . La investigación genética comprenderá el estado de MSI, la presencia de una mutación K-Ras y BRAF