Immunscore som en prognostisk markør for patienter med en tyktarmskræft (IMMUCOL)

Hovedformålet er at vurdere virkningen af ​​immunscore i den kliniske praksis. Til dette formål vil immunparameteren (CD3, CD8, CD45RO) for kolorektale cancere (stadie I-IV) blive evalueret prospektivt gennem et stort multicenterstudie. 400 patienter med CRC stadium I til IV vil blive inkluderet (6 centre for inklusion; Paris-HEGP, Dijon, Bobigny-Avicenne, Besancon, Poitiers, Rouen). Antallet af patienter, der skal inkluderes, er beregnet ud fra en inklusionsperiode på 24 måneder, en opfølgning på 3 år (der planlægges en indsamling af data i løbet af 4. og 5. år med en medfinansiering), en forventet hændelsesrate på 20 %, en prognostisk værdi af immunparameteren svarende til den, der blev observeret i den retrospektive undersøgelse af 399 patienter med CRC (*1) og en teststyrke på 90 %. Under både indledende behandling og opfølgning vil alle terapeutiske procedurer blive registreret (kirurgi, strålebehandling, kemoterapi...). Data vil blive indsamlet fra klinisk undersøgelse, radiologiske undersøgelser og biologiske test, der normalt udføres under en hospitalsindlæggelse for tyktarmskræft: Fuld klinisk undersøgelse og spørgsmål om tilstedeværelsen af ​​personlig og familiehistorie med CRC, adenomer og andre kræftformer; Abdominal ultralyd, røntgen af ​​thorax; Computertomografi (CT) og magnetisk resonansbilleddannelse (MRI) i henhold til klinikerens krav; Standard laboratorietest og blodanalyse for carcinoembryonalt antigen (CEA); Den histopatologiske undersøgelse af tumoren, der indeholder status for de kirurgiske udskæringsmarginer, den histologiske type cancer, niveauet af parietal invasion, antallet af undersøgte lymfeknuder og antallet af metastatiske lymfeknuder, ifølge TNM-klassifikationen. Patienterne vil blive fulgt op hver 3. måned i de første 2 år og hver 6. måned i resten af ​​opfølgningsperioden, som anbefalet. Hver patient vil blive fulgt op til 5 år. Kliniske, biologiske og radiologiske data vil blive registreret i en specifik CRF. Verifikation af inkluderinger og overvågning af data vil blive udført af HEGP Clinical Research Unit (URC HEGP) og den primære investigator. En plan for datastyring vil blive bygget i overensstemmelse med overvågningen. Der vil også blive sendt et spørgeskema til patienterne hver sjette måned i fem år. Dette spørgeskema blev bygget af Pr F Pagès og af psykologer og psykiatere for at søge efter information om (i) tilstedeværelsen af ​​en immunforstyrrelse (såsom allergi, autoimmunitet, inflammatorisk proces) og (ii) patienternes psykologiske status (f. depression). Efter overvågning vil alle data blive lagret ved hjælp af et dobbelt dataindtastningssystem i en MS-Access-database designet af URC-HEGP og i TME.dB-databasen oprettet af teamet af hovedefterforskeren. De 2 databaser vil blive slået sammen, og den endelige database vil blive frosset til statistisk analyse. Prøveforberedelse: Patologen på hvert center vil vælge en tumorblok, der indeholder tumorens kerne og den invasive margin. Denne tumorblok er en del af de tumorprøver, der rutinemæssigt behandles af patologisk afdeling til diagnosticering. tre vævssnit på 4 mikron vil blive lavet og deponeret på et objektglas for at udføre immunhistokemien. Fire vævssektioner på 4-mikroner vil blive lavet og deponeret på et Eppendorf safe lock-rør for at udføre de genetiske analyser. Anonyme patientnavne på objektglassene og rørene vil blive angivet ved hjælp af et kodenummer og initialer på patienten. Hvis biopsier til diagnostiske formål er tilgængelige (dvs. dem, der udføres for patienterne under deres indledende hospitalsindlæggelse (50 % af tilfældene), vil der blive foretaget A-vævssnit af hver biopsi. Alle slides og rør vil blive sendt med post til HEGP platformen for analyse af immuninfiltratet og til Biologisk afdeling for de genetiske analyser. Immunoresultatet bestemmes ved hjælp af følgende trin: Immunfarvninger for CD3, CD8, CD45RO på Benchmark XT automate; Scanning af immunfarvningerne på Hamamatsu scanner: Kvantificering af immunpopulationerne i specifikke tumorområder (kernen og den invasive margin) med et dedikeret billedanalysemodul baseret på genkendelse af histologiske strukturer tilpasset kolorektal cancer. Dette modul er udviklet af vores gruppe i forbindelse med Definiens-virksomheden. En semi-automatisk procedure muliggør kvantificering af farvede celler i hver tumorregion. Hver region er opdelt i fliser på 800 mikron side (500 til 700 fliser analyseret pr. tumor). Tætheden af ​​hver markør beregnes ved at bruge middeldensiteten af ​​de tre fliser, der er mest infiltreret i hver tumorregion. En kategorisering i høj tæthed (Hi) eller lav (Lo) for hver markør i hver tumorregion af interesse vil blive udført. Denne kategorisering udføres ved at sammenligne den observerede tæthed med den optimale afskæringsdensitet (min p-værditilgang), vi tidligere har bestemt for DFS og OS i en retrospektiv undersøgelse af 250 CRC. Genetiske analyser: Rørene med sektionerne til genetiske analyser af patienter med informeret samtykke underskrevet til genetisk undersøgelse vil blive overført til Biologisk Afdeling, Hôpital Européen Georges Pompidou. Procentdelen af ​​tumorceller i hver prøve vil blive bestemt af en patolog (baseret på en H&E-evaluering; mindre end 10 %, 10-20 %, 20-50 %, op til 50 % tumorceller), og DNA-ekstraktion vil blive udført . Genetisk undersøgelse vil omfatte MSI-status, tilstedeværelsen af ​​en K-Ras- og BRAF-mutation