Immunoscore prognostisena merkkinä potilaille, joilla on paksusuolen syöpä (IMMUCOL)

Päätavoitteena on arvioida immunoscore-tuloksen vaikutusta kliinisessä käytännössä. Tätä varten paksusuolensyöpien (vaihe I-IV) immuuniparametria (CD3, CD8, CD45RO) arvioidaan prospektiivisesti suuren monikeskustutkimuksen avulla. Mukaan otetaan 400 potilasta, joilla on CRC-vaihe I–IV (6 tutkimuskeskusta; Paris-HEGP, Dijon, Bobigny-Avicenne, Besancon, Poitiers, Rouen). Mukaan otettavien potilaiden määrä on laskettu 24 kuukauden sisällytysjakson, 3 vuoden seurannan perusteella (4. ja 5. vuoden tietojen keruu on suunniteltu yhteisrahoituksella), odotettavissa oleva tapahtumatiheys 20 %, immuuniparametrin prognostinen arvo, joka on samanlainen kuin retrospektiivisessä tutkimuksessa, jossa oli 399 CRC-potilasta (*1), ja testin teho 90 %. Sekä alkuhoidon että seurannan aikana kaikki terapeuttiset toimenpiteet (leikkaus, sädehoito, kemoterapia…) rekisteröidään. Tietoja kerätään kliinisistä tutkimuksista, radiologisista tutkimuksista ja biologisista testeistä, jotka yleensä suoritetaan kolorektaalisyövän sairaalahoidon aikana: Täydellinen kliininen tutkimus ja kyselyt CRC:n, adenoomien ja muiden syöpien henkilökohtaisesta ja suvussa esiintymisestä; Vatsan ultraääni, rintakehän röntgenkuvaus; Tietokonetomografia (CT) ja magneettikuvaus (MRI) kliinikon vaatimuksen mukaan; Standardilaboratoriokokeet ja verimääritys karsinoembryonaalisen antigeenin (CEA) toteamiseksi; Kasvaimen histopatologinen tutkimus, joka sisältää leikkausreunojen tilan, syövän histologisen tyypin, parietaalisen invaasion tason, tutkittujen imusolmukkeiden lukumäärän ja metastaattisten imusolmukkeiden lukumäärän TNM-luokituksen mukaan. Potilaita seurataan 3 kuukauden välein ensimmäisten 2 vuoden aikana ja 6 kuukauden välein loppuseurantajakson ajan suosituksen mukaisesti. Jokaista potilasta seurataan enintään 5 vuoden ajan. Kliiniset, biologiset ja radiologiset tiedot rekisteröidään tiettyyn CRF:ään. HEGP:n kliininen tutkimusyksikkö (URC HEGP) ja päätutkija suorittavat inkluusioiden varmentamisen ja tietojen seurannan. Tietojenhallinnan suunnitelma laaditaan seurannan mukaisesti. Myös kyselylomake lähetetään potilaille kuuden kuukauden välein viiden vuoden ajan. Tämän kyselylomakkeen ovat laatineet Pr F Pagès sekä psykologit ja psykiatrit etsiäkseen tietoa (i) immuunihäiriön (kuten allergia, autoimmuniteetti, tulehdusprosessi) olemassaolosta ja (ii) potilaiden psykologisesta tilasta (esim. masennus). Valvonnan jälkeen kaikki tiedot tallennetaan kaksinkertaisen tiedonsyöttöjärjestelmän avulla URC-HEGP:n suunnittelemaan MS-Access-tietokantaan ja päätutkijan tiimin luomaan TME.dB-tietokantaan. Kaksi tietokantaa yhdistetään ja lopullinen tietokanta jäädytetään tilastollista analyysiä varten. Näytteen valmistelu: Kunkin keskuksen patologi valitsee kasvainlohkon, joka sisältää kasvaimen ytimen ja invasiivisen reunan. Tämä kasvainlohko on osa kasvainnäytteitä, joita patologian osasto käsittelee rutiininomaisesti diagnoosia varten. valmistetaan kolme 4 mikronin kudosleikkaa, jotka asetetaan lasilevylle immunohistokemian suorittamiseksi. Tehdään neljä 4 mikronin kudosleikkaa, jotka talletetaan Eppendorfin turvalukkoputkiin geneettisten analyysien suorittamista varten. Objektilaseilla ja putkilla olevat nimettömät potilaiden nimet annetaan käyttämällä koodinumeroa ja potilaan nimikirjaimia. Jos biopsiat diagnostisia tarkoituksia varten ovat saatavilla (esim. ne, jotka suoritetaan potilaille heidän ensimmäisen sairaalahoidon aikana (50 % tapauksista). Jokaisesta biopsiasta tehdään kudosleikkeet. Kaikki objektilasit ja putket lähetetään postitse HEGP-alustalle immuunitunkeutumisen analysointia varten ja biologian osastolle geneettisiä analyyseja varten. Immunoscore määritetään käyttämällä seuraavia vaiheita: Immunovärjäykset CD3:lle, CD8:lle, CD45RO:lle Benchmark XT -automaatilla; Immunovärjäysten skannaus Hamamatsu-skannerilla: Immuunipopulaatioiden kvantifiointi tietyillä kasvainalueilla (ydin ja invasiivinen marginaali) erillisellä kuva-analyysimoduulilla, joka perustuu paksusuolen syöpään sopeutuneiden histologisten rakenteiden tunnistamiseen. Tämän moduulin on kehittänyt ryhmämme Definiens-yhtiön yhteydessä. Puoliautomaattinen menettely mahdollistaa värjäytyneiden solujen kvantifioinnin kullakin kasvainalueella. Jokainen alue on jaettu 800 mikronin sivuisiin laattoihin (500 - 700 laattaa analysoituna kasvainta kohti). Kunkin markkerin tiheys lasketaan käyttämällä kunkin kasvainalueen kolmen eniten infiltroituneen laatan keskimääräistä tiheyttä. Luokittelu korkeaan tiheyteen (Hi) tai matalaan (Lo) kullekin markkerille kullakin kiinnostavalla kasvainalueella. Tämä luokittelu tehdään vertaamalla havaittua tiheyttä optimaaliseen rajatiheyteen (min p-arvon lähestymistapa), jonka määritimme aiemmin DFS:lle ja OS:lle retrospektiivisessä 250 CRC:n tutkimuksessa. Geneettiset analyysit: Putket, jotka sisältävät osiot geneettiseen tutkimukseen allekirjoitettujen potilaiden geneettisiä analyysejä varten, siirretään Hôpital Européen Georges Pompidoun biologian laitokselle. Patologi määrittää kunkin näytteen kasvainsolujen prosenttiosuuden (H&E-arvioinnin perusteella; alle 10 %, 10-20 %, 20-50 %, jopa 50 % kasvainsoluja) ja DNA-uutto suoritetaan . Geneettinen tutkimus käsittää MSI-statuksen, K-Ras- ja BRAF-mutaation