Immunscore som en prognostisk markør for pasienter med kolorektal kreft (IMMUCOL)

Hovedmålet er å vurdere effekten av immunscore i klinisk praksis. For dette formål vil immunparameteren (CD3, CD8, CD45RO) for kolorektale kreftformer (stadium I-IV) bli evaluert prospektivt gjennom en stor multisenterstudie. 400 pasienter med CRC stadium I til IV vil bli inkludert (6 sentre for inkludering; Paris-HEGP, Dijon, Bobigny-Avicenne, Besancon, Poitiers, Rouen). Antall pasienter som skal inkluderes er beregnet ut fra en inklusjonstid på 24 måneder, en oppfølging på 3 år (det planlegges en innsamling av data i løpet av 4. og 5. år med en medfinansiering), en forventet hendelsesrate på 20 %, en prognostisk verdi av immunparameteren lik den som ble observert i den retrospektive studien av 399 pasienter med CRC (*1) og en teststyrke på 90 %. Under både førstegangsbehandling og oppfølging vil alle terapeutiske prosedyrer bli registrert (kirurgi, strålebehandling, kjemoterapi...). Data vil bli samlet inn fra klinisk undersøkelse, radiologiske undersøkelser og biologiske tester som vanligvis utføres under en sykehusinnleggelse for tykktarmskreft: Full klinisk undersøkelse og spørsmål om tilstedeværelsen av personlig og familiehistorie med CRC, adenomer og andre kreftformer; Abdominal ultralyd, røntgen av thorax; Computertomografi (CT) og magnetisk resonansavbildning (MRI) i henhold til klinikerens krav; Standard laboratorietester og blodanalyse for karsinoembryonalt antigen (CEA); Den histopatologiske studien av svulsten som inneholder statusen til de kirurgiske eksisjonsmarginene, den histologiske typen kreft, nivået av parietal invasjon, antall undersøkte lymfeknuter og antall metastatiske lymfeknuter, i henhold til TNM-klassifiseringen. Pasientene vil følges opp hver 3. måned de første 2 årene, og hver 6. måned resten av oppfølgingsperioden, som anbefalt. Hver pasient vil bli fulgt i opptil 5 år. Kliniske, biologiske og radiologiske data vil bli registrert i en spesifikk CRF. Verifikasjon av inkluderinger og overvåking av data vil bli utført av HEGP Clinical Research Unit (URC HEGP) og hovedetterforskeren. En plan for datahåndtering skal bygges i tråd med overvåkingen. Det vil også bli sendt ut et spørreskjema til pasientene hver sjette måned i fem år. Dette spørreskjemaet ble bygget av Pr F Pagès og av psykologer og psykiatere for å søke etter informasjon om (i) tilstedeværelsen av en immunforstyrrelse (som allergi, autoimmunitet, inflammatorisk prosess) og (ii) den psykologiske statusen til pasientene (f.eks. depresjon). Etter overvåking vil alle data lagres ved hjelp av et dobbelt dataregistreringssystem i en MS-Access-database designet av URC-HEGP og i TME.dB-databasen opprettet av teamet til hovedetterforskeren. De 2 databasene vil bli slått sammen, og den endelige databasen vil fryses for statistisk analyse. Prøveforberedelse: Patologen ved hvert senter vil velge en tumorblokk som inneholder svulstens kjerne og den invasive marginen. Denne tumorblokken er en del av tumorprøvene som rutinemessig behandles av patologisk avdeling for diagnostisering. tre vevsseksjoner på 4 mikron vil bli laget og lagt på et glassglass for å utføre immunhistokjemien. Fire vevsseksjoner på 4 mikron vil bli laget og deponert på et Eppendorf safe lock-rør for å utføre de genetiske analysene. Anonyme pasientnavn på lysbildene og rørene vil bli gitt ved å bruke et kodenummer og initialer til pasienten. Hvis biopsier for diagnostiske formål er tilgjengelige (dvs. de som ble utført for pasientene under deres første sykehusinnleggelse (50 % av tilfellene), vil det bli tatt vevssnitt av hver biopsi. Alle lysbilder og tuber vil bli sendt per post til HEGP-plattformen for analyse av immuninfiltratet og til Biologisk avdeling for de genetiske analysene. Immunpoengsummen vil bli bestemt ved å bruke følgende trinn: Immunfarging for CD3, CD8, CD45RO på Benchmark XT automate; Skanning av immunfargingen på Hamamatsu-skanner: Kvantifisering av immunpopulasjonene i spesifikke tumorområder (kjernen og den invasive marginen) med en dedikert bildeanalysemodul basert på gjenkjennelse av histologiske strukturer tilpasset kolorektal kreft. Denne modulen er utviklet av vår gruppe i forbindelse med Definiens-selskapet. En semi-automatisk prosedyre tillater kvantifisering av fargede celler i hver tumorregion. Hver region er delt inn i fliser på 800 mikron side (500 til 700 fliser analysert per svulst). Tettheten til hver markør beregnes ved å bruke den gjennomsnittlige tettheten til de tre flisene som er mest infiltrert i hver tumorregion. En kategorisering i høy tetthet (Hi) eller lav (Lo) for hver markør i hver tumorregion av interesse vil bli utført. Denne kategoriseringen gjøres ved å sammenligne den observerte tettheten med den optimale cut-off tettheten (min p verdi tilnærming) vi tidligere har bestemt for DFS og OS i en retrospektiv studie av 250 CRC. Genetiske analyser: Rørene som inneholder seksjonene for genetiske analyser av pasienter med informert samtykke signert for genetisk undersøkelse vil bli overført til Institutt for biologi, Hôpital Européen Georges Pompidou. Prosentandelen av tumorceller av hver prøve vil bli bestemt av en patolog (basert på en H&E-evaluering; mindre enn 10 %, 10-20 %, 20-50 %, opptil 50 % tumorceller) og DNA-ekstraksjonen vil bli utført . Genetisk undersøkelse vil omfatte MSI-status, tilstedeværelsen av en K-Ras og BRAF-mutasjon