Иммуноскора как прогностический маркер для больных колоректальным раком (IMMUCOL)

Основная цель – оценить влияние иммуноскоры на клиническую практику. С этой целью иммунный параметр (CD3, CD8, CD45RO) колоректального рака (стадия I-IV) будет оцениваться проспективно в рамках крупного многоцентрового исследования. Будут включены 400 пациентов с CRC стадии I-IV (6 центров для включения; Paris-HEGP, Dijon, Bobigny-Avicenne, Besancon, Poitiers, Rouen). Количество пациентов, подлежащих включению, было рассчитано на основе периода включения в 24 месяца, наблюдения в течение 3 лет (сбор данных в течение 4-го и 5-го года планируется при совместном финансировании), ожидаемого частота событий 20%, прогностическое значение иммунного параметра, подобное наблюдаемому в ретроспективном исследовании 399 пациентов с КРР (*1), и мощность теста 90%. Во время начального лечения и последующего наблюдения будут зарегистрированы все терапевтические процедуры (хирургия, лучевая терапия, химиотерапия…). Данные будут собираться в результате клинического осмотра, радиологических исследований и биологических тестов, которые обычно проводятся во время госпитализации по поводу колоректального рака: Полное клиническое обследование и опрос о наличии в личном и семейном анамнезе колоректального рака, аденом и других видов рака; УЗИ органов брюшной полости, рентген грудной клетки; Компьютерная томография (КТ) и магнитно-резонансная томография (МРТ) по требованию врача; Стандартные лабораторные анализы и анализ крови на раково-эмбриональный антиген (СЕА); Гистопатологическое исследование опухоли, содержащее состояние краев хирургического иссечения, гистологический тип рака, уровень пристеночной инвазии, количество исследованных лимфатических узлов и количество метастатических лимфатических узлов в соответствии с классификацией TNM. В соответствии с рекомендациями пациенты будут наблюдаться каждые 3 месяца в течение первых 2 лет и каждые 6 месяцев в течение остального периода наблюдения. Каждый пациент будет находиться под наблюдением до 5 лет. Клинические, биологические и радиологические данные будут зарегистрированы в специальной ИРК. Проверка включений и мониторинг данных будут проводиться Отделом клинических исследований HEGP (URC HEGP) и главным исследователем. План управления данными будет разработан в соответствии с мониторингом. Анкета также будет рассылаться пациентам каждые шесть месяцев в течение пяти лет. Этот опросник был составлен профессором Ф. Пагесом совместно с психологами и психиатрами для поиска информации, касающейся (i) наличия иммунных нарушений (таких как аллергия, аутоиммунитет, воспалительный процесс) и (ii) психологического статуса пациентов (например, депрессия). После мониторинга все данные будут храниться с использованием системы двойного ввода данных в базе данных MS-Access, разработанной URC-HEGP, и в базе данных TME.dB, созданной группой главного исследователя. Две базы данных будут объединены, а окончательная база данных будет заморожена для статистического анализа. Подготовка образца: патологоанатом каждого центра выберет опухолевой блок, содержащий ядро ​​опухоли и инвазивный край. Этот опухолевый блок является частью образцов опухоли, которые обычно обрабатываются отделением патологии для диагностики. будут сделаны три среза ткани размером 4 микрона и помещены на предметное стекло для проведения иммуногистохимии. Будут сделаны четыре среза ткани толщиной 4 микрона и помещены в пробирки с безопасным замком Eppendorf для проведения генетического анализа. Анонимные имена пациентов на предметных стеклах и пробирках будут указаны с использованием кодового номера и инициалов пациента. Если доступны биопсии для диагностических целей (т. те, которые выполняются для пациентов во время их первоначальной госпитализации (50% случаев), будут сделаны срезы ткани каждой биопсии. Все предметные стекла и пробирки будут отправлены по почте на платформу HEGP для анализа иммунного инфильтрата и в отделение биологии для генетического анализа. Иммунная оценка будет определяться с использованием следующих шагов: иммуноокрашивание для CD3, CD8, CD45RO на автомате Benchmark XT; Сканирование иммуноокрашивания на сканере Hamamatsu: количественная оценка иммунных популяций в определенных областях опухоли (ядро и инвазивный край) с помощью специального модуля анализа изображений, основанного на распознавании гистологических структур, адаптированных к колоректальному раку. Этот модуль был разработан нашей группой совместно с компанией Definiens. Полуавтоматическая процедура позволяет проводить количественную оценку окрашенных клеток в каждой области опухоли. Каждая область делится на плитки со стороной 800 микрон (от 500 до 700 плиток анализируется на опухоль). Плотность каждого маркера рассчитывается с использованием средней плотности трех плиток, наиболее инфильтрированных в каждой области опухоли. Будет выполнена категоризация на высокую плотность (Hi) или низкую (Lo) для каждого маркера в каждой интересующей области опухоли. Эта категоризация осуществляется путем сравнения наблюдаемой плотности с оптимальной пороговой плотностью (подход с минимальным значением p), которую мы ранее определили для DFS и OS в ретроспективном исследовании 250 CRC. Генетические анализы: пробирки, содержащие срезы для генетических анализов пациентов с информированным согласием, подписанным на генетическое исследование, будут переданы в отделение биологии Европейской больницы имени Жоржа Помпиду. Процент опухолевых клеток в каждом образце будет определен патологоанатомом (на основе оценки H&E; менее 10%, 10-20%, 20-50%, до 50% опухолевых клеток), и будет проведена экстракция ДНК. . Генетическое исследование будет включать статус MSI, наличие мутации K-Ras и BRAF.