Der Immunscore als prognostischer Marker für Patienten mit Darmkrebs (IMMUCOL)

Das Hauptziel besteht darin, die Auswirkungen des Immunscores in der klinischen Praxis zu bewerten. Dazu werden die Immunparameter (CD3, CD8, CD45RO) von kolorektalen Karzinomen (Stadium I-IV) prospektiv in einer großen multizentrischen Studie evaluiert. 400 Patienten mit CRC Stadium I bis IV werden eingeschlossen (6 Zentren für die Aufnahme; Paris-HEGP, Dijon, Bobigny-Avicenne, Besancon, Poitiers, Rouen). Die Anzahl der einzuschließenden Patienten wurde auf der Grundlage einer Einschlusszeit von 24 Monaten, einer Nachbeobachtungszeit von 3 Jahren (eine Datenerhebung im 4. und 5. Jahr ist mit einer Kofinanzierung geplant) und einer Erwartung berechnet Ereignisrate von 20 %, ein ähnlicher prognostischer Wert des Immunparameters wie in der retrospektiven Studie an 399 Patienten mit CRC (*1) und eine Power des Tests von 90 %. Sowohl während der Erstbehandlung als auch bei der Nachsorge werden alle therapeutischen Verfahren registriert (Operation, Strahlentherapie, Chemotherapie…). Es werden Daten aus klinischen Untersuchungen, radiologischen Untersuchungen und biologischen Tests erhoben, die normalerweise während eines Krankenhausaufenthalts wegen Dickdarmkrebs durchgeführt werden: Vollständige klinische Untersuchung und Befragung zum Vorhandensein einer persönlichen und familiären Vorgeschichte von CRC, Adenomen und anderen Krebsarten; Abdominal-Ultraschall, Röntgen-Thorax; Computertomographie (CT) und Magnetresonanztomographie (MRT) nach Bedarf des Arztes; Standard-Labortests und Bluttests für karzinoembryonales Antigen (CEA); Die histopathologische Untersuchung des Tumors, die den Status der chirurgischen Exzisionsränder, den histologischen Krebstyp, das Ausmaß der parietalen Invasion, die Anzahl der untersuchten Lymphknoten und die Anzahl der metastasierten Lymphknoten gemäß der TNM-Klassifikation enthält. Die Patienten werden wie empfohlen in den ersten 2 Jahren alle 3 Monate und während der restlichen Nachbeobachtungszeit alle 6 Monate nachuntersucht. Jeder Patient wird bis zu 5 Jahre nachbeobachtet. Klinische, biologische und radiologische Daten werden in einem speziellen CRF registriert. Die Überprüfung der Einschlüsse und die Überwachung der Daten werden von der HEGP Clinical Research Unit (URC HEGP) und dem Hauptprüfarzt durchgeführt. Im Einklang mit der Überwachung wird ein Plan für das Datenmanagement erstellt. Außerdem wird fünf Jahre lang alle sechs Monate ein Fragebogen an die Patienten verschickt. Dieser Fragebogen wurde von Pr. F. Pagès und Psychologen und Psychiatern erstellt, um nach Informationen zu (i) dem Vorhandensein einer Immunstörung (wie Allergie, Autoimmunität, Entzündungsprozess) und (ii) dem psychologischen Status der Patienten (z. Depression). Nach der Überwachung werden alle Daten mit einem doppelten Dateneingabesystem in einer vom URC-HEGP entworfenen MS-Access-Datenbank und in der vom Team des Projektleiters erstellten TME.dB-Datenbank gespeichert. Die beiden Datenbanken werden zusammengeführt und die endgültige Datenbank wird für statistische Analysen eingefroren. Probenvorbereitung: Der Pathologe jedes Zentrums wählt einen Tumorblock aus, der den Kern des Tumors und den Invasionsrand enthält. Dieser Tumorblock ist Teil der Tumorproben, die routinemäßig von der Abteilung für Pathologie zur Diagnose verarbeitet werden. Es werden drei Gewebeschnitte von 4 Mikron angefertigt und auf einem Glasobjektträger abgelegt, um die Immunhistochemie durchzuführen. Es werden vier Gewebeschnitte von 4 Mikron angefertigt und auf Eppendorf-Safe-Lock-Röhrchen abgelegt, um die genetischen Analysen durchzuführen. Anonyme Patientennamen auf den Objektträgern und Röhrchen werden unter Verwendung einer Codenummer und Initialen des Patienten bereitgestellt. Wenn Biopsien für diagnostische Zwecke verfügbar sind (z. diejenigen, die für die Patienten während ihres ersten Krankenhausaufenthalts durchgeführt werden (50 % der Fälle). Bei jeder Biopsie wird ein Gewebeschnitt durchgeführt. Alle Objektträger und Röhrchen werden per Post an die HEGP-Plattform zur Analyse des Immuninfiltrats und an die Abteilung Biologie für die genetischen Analysen gesendet. Der Immunscore wird anhand der folgenden Schritte bestimmt: Immunfärbungen für CD3, CD8, CD45RO auf Benchmark XT Automat; Scannen der Immunfärbungen auf einem Hamamatsu-Scanner: Quantifizierung der Immunpopulationen in bestimmten Tumorbereichen (dem Kern und dem Invasionsrand) mit einem speziellen Bildanalysemodul, das auf der Erkennung histologischer Strukturen basiert, die an Darmkrebs angepasst sind. Dieses Modul wurde von unserer Gruppe in Zusammenarbeit mit der Firma Definiens entwickelt. Ein halbautomatisches Verfahren ermöglicht die Quantifizierung gefärbter Zellen in jeder Tumorregion. Jede Region wird in Kacheln mit einer Seitenlänge von 800 Mikrometer unterteilt (500 bis 700 Kacheln werden pro Tumor analysiert). Die Dichte jedes Markers wird unter Verwendung der mittleren Dichte der drei Kacheln berechnet, die in jeder Tumorregion am stärksten infiltriert sind. Eine Kategorisierung in hohe Dichte (Hi) oder niedrige (Lo) für jeden Marker in jeder interessierenden Tumorregion wird durchgeführt. Diese Kategorisierung erfolgt durch Vergleich der beobachteten Dichte mit der optimalen Cut-off-Dichte (Min-p-Wert-Ansatz), die wir zuvor in einer retrospektiven Studie von 250 CRC für DFS und OS ermittelt haben. Genetische Analysen: Die Röhrchen, die die Schnitte für die genetischen Analysen von Patienten enthalten, die eine informierte Einwilligung zur genetischen Untersuchung unterzeichnet haben, werden an die Abteilung für Biologie des Hôpital Européen Georges Pompidou übergeben. Der Prozentsatz der Tumorzellen jeder Probe wird von einem Pathologen bestimmt (basierend auf einer H&E-Bewertung; weniger als 10 %, 10–20 %, 20–50 %, bis zu 50 % Tumorzellen) und die DNA-Extraktion wird durchgeführt . Die genetische Untersuchung umfasst den MSI-Status, das Vorhandensein einer K-Ras- und BRAF-Mutation