De Immunoscore als een prognostische marker voor patiënten met colorectale kanker (IMMUCOL)

Het belangrijkste doel is om de impact van de immunoscore in de klinische praktijk te beoordelen. Hiertoe zal de immuunparameter (CD3, CD8, CD45RO) van colorectale kankers (stadium I-IV) prospectief geëvalueerd worden via een grote multicenter studie. 400 patiënten met CRC stadium I tot IV zullen worden opgenomen (6 centra voor inclusie: Paris-HEGP, Dijon, Bobigny-Avicenne, Besançon, Poitiers, Rouen). Het aantal te includeren patiënten is berekend op basis van een inclusieperiode van 24 maanden, een follow-up van 3 jaar (een verzameling van gegevens gedurende het 4e en 5e jaar is gepland met cofinanciering), een verwacht event rate van 20%, een prognostische waarde van de immuunparameter vergelijkbaar met die waargenomen in de retrospectieve studie van 399 patiënten met CRC (*1) en een power of the test van 90%. Tijdens zowel het initiële beheer als de follow-up worden alle therapeutische procedures geregistreerd (chirurgie, radiotherapie, chemotherapie…). Er zullen gegevens worden verzameld van klinisch onderzoek, radiologische onderzoeken en biologische tests die gewoonlijk worden uitgevoerd tijdens een ziekenhuisopname voor colorectale kanker: Volledig klinisch onderzoek en vragen over de aanwezigheid van persoonlijke en familiegeschiedenis van CRC, adenomen en andere kankers; Abdominale echografie, thoraxfoto; Computertomografie (CT) en magnetische resonantiebeeldvorming (MRI) volgens de eis van de clinicus; Standaard laboratoriumtests en bloedonderzoek voor carcino-embryonaal antigeen (CEA); De histopathologische studie van de tumor met de status van de chirurgische excisiemarges, het histologische type kanker, het niveau van pariëtale invasie, het aantal onderzochte lymfeklieren en het aantal metastatische lymfeklieren, volgens de TNM-classificatie. Patiënten zullen gedurende de eerste 2 jaar elke 3 maanden worden gecontroleerd en gedurende de rest van de follow-upperiode elke 6 maanden, zoals aanbevolen. Elke patiënt wordt tot 5 jaar gevolgd. Klinische, biologische en radiologische gegevens worden geregistreerd in een specifiek CRF. Verificatie van inclusies en monitoring van gegevens zal worden uitgevoerd door de HEGP Clinical Research Unit (URC HEGP) en de hoofdonderzoeker. Aansluitend bij de monitoring wordt een plan voor datamanagement gebouwd. Ook zal gedurende vijf jaar om de zes maanden een vragenlijst naar de patiënten worden gestuurd. Deze vragenlijst werd opgesteld door Pr F Pagès en door psychologen en psychiaters om informatie te zoeken over (i) de aanwezigheid van een immuunstoornis (zoals allergie, auto-immuniteit, ontstekingsproces) en (ii) de psychologische toestand van de patiënten (bv. depressie). Na monitoring worden alle gegevens opgeslagen met behulp van een dubbel gegevensinvoersysteem in een MS-Access-database ontworpen door de URC-HEGP en in de TME.dB-database gemaakt door het team van de hoofdonderzoeker. De 2 databases worden samengevoegd en de definitieve database wordt bevroren voor statistische analyse. Monstervoorbereiding: de patholoog van elk centrum kiest een tumorblok dat de kern van de tumor en de invasieve marge bevat. Deze tumorblokkade maakt deel uit van de tumormonsters die de afdeling Pathologie routinematig verwerkt voor diagnostiek. er zullen drie weefselsecties van 4 micron worden gemaakt en op een glasplaatje worden gedeponeerd om de immunohistochemie uit te voeren. Er zullen vier weefselsecties van 4 micron worden gemaakt en op Eppendorf safe lock-buisjes worden gedeponeerd om de genetische analyses uit te voeren. Anonieme patiëntnamen op de objectglaasjes en buisjes worden aangebracht door middel van een codenummer en initialen van de patiënt. Als biopten voor diagnostische doeleinden beschikbaar zijn (d.w.z. die uitgevoerd voor de patiënten tijdens hun eerste ziekenhuisopname (50% van de gevallen), zal een weefselsectie van elke biopsie worden gedaan. Alle objectglaasjes en buisjes worden per post verzonden naar het HEGP-platform voor analyse van het immuuninfiltraat en naar de afdeling Biologie voor de genetische analyses. De immunoscore wordt bepaald aan de hand van de volgende stappen: Immunokleuringen voor CD3, CD8, CD45RO op Benchmark XT automatiseren; Scannen van de immunokleuringen op de Hamamatsu-scanner: kwantificering van de immuunpopulaties in specifieke tumorgebieden (de kern en de invasieve marge) met een speciale beeldanalysemodule op basis van de herkenning van histologische structuren aangepast aan colorectale kanker. Deze module is ontwikkeld door onze groep in samenwerking met de firma Definiens. Een semi-automatische procedure maakt de kwantificering van gekleurde cellen in elk tumorgebied mogelijk. Elke regio is verdeeld in tegels van 800 micron zijde (500 tot 700 tegels geanalyseerd per tumor). De dichtheid van elke marker wordt berekend met behulp van de gemiddelde dichtheid van de drie tegels die het meest zijn geïnfiltreerd in elk tumorgebied. Er zal een categorisatie worden uitgevoerd in hoge dichtheid (Hi) of lage (Lo) voor elke marker in elk van belang zijnd tumorgebied. Deze indeling wordt gedaan door de waargenomen dichtheid te vergelijken met de optimale afkapdichtheid (benadering van de min p-waarde) die we eerder hebben bepaald voor de DFS en OS in een retrospectieve studie van 250 CRC. Genetische analyses: De buizen met de secties voor de genetische analyses van patiënten met geïnformeerde toestemming ondertekend voor genetisch onderzoek zullen worden overgebracht naar de afdeling Biologie, Hôpital Européen Georges Pompidou. Het percentage tumorcellen van elk monster zal worden bepaald door een patholoog (gebaseerd op een H&E-evaluatie; minder dan 10%, 10-20%, 20-50%, tot 50% tumorcellen) en de DNA-extractie zal worden uitgevoerd . Genetisch onderzoek zal bestaan ​​uit de MSI-status, de aanwezigheid van een K-Ras- en BRAF-mutatie