Srovnání morfometrického hodnocení pomocí methylzeleného pyroninu a barvení AgNOR orálního spinocelulárního karcinomu (OSCC)

Rakovina ústní dutiny, hlavní globální zdravotní problém, zaujímá celosvětově šestou pozici s výraznými rozdíly v geografickém rozšíření. Je to třetí nejčastější rakovina v rozvojovém světě po rakovině žaludku a děložního čípku. Mezi rakovinami ústní dutiny představuje spinocelulární karcinom ústní dutiny více než 90 % případů.

Z rozvojových zemí tvoří subkontinent Indo-Pak jednu třetinu celosvětové zátěže rakovinou ústní dutiny. Karcinom dutiny ústní v Pákistánu, jedné z vysoce rizikových zemí, je druhým nejčastějším nádorovým onemocněním u obou pohlaví. S rozdílnou distribucí mezi subpopulacemi představuje 8,8 % všech hlášených případů rakoviny. Mezi nejvíce převažující rizikové faktory patří kouření tabáku, žvýkání betelu a alkohol.

Screening a specifické diagnostické nástroje jsou dva inovativní přístupy pro včasnou detekci rakoviny dutiny ústní. Konvenční orální vyšetření a klinické hodnocení zůstává základem screeningových přístupů, zatímco chirurgická biopsie následovaná histologickou analýzou je považována za zlatý standard pro diagnostiku maligních ústních lézí. Kromě toho některé doplňkové techniky mohou přispět k diagnóze rakoviny ústní dutiny. Z těchto životně důležitých barvení jsou nyní v popředí analýza DNA, chemiluminiscence, tkáňová fluorescence, detekční systémy založené na světle a biomarkery.

Biomarkery byly cenné při odhalování dalších informací o nádorové patologii, včetně inaktivace nádorových supresorových genů, angiogeneze, apoptózy a buněčné proliferace. Aberace v kinetice proliferace jsou nejdůležitějším faktorem během progrese nádoru. Tři hlavní kategorie markerů buněčné proliferace zahrnují markery růstových frakcí, jako je Ki67, markery specifické pro cyklus, jako je PCNA (proliferující buněčný nukleární antigen) a markery doby buněčného cyklu, jako je AgNOR. Během malignity je proliferace a syntéza bílkovin řízena hlavně jádrem.

Nucleolar Organizer Regions (NOR) jsou smyčky DNA na krátkých ramenech akrocentrických chromozomů, které jsou pravděpodobně spojeny s buněčnou proliferací. Některé z proteinů asociovaných s NOR jsou argyrofilní a mohou být demonstrovány jako černé tečky technikou barvení stříbrem a takto demonstrované struktury jsou známé jako AgNORs. Kvantitativní parametry AgNOR poskytují informace o rychlosti buněčné proliferace během buněčného cyklu. Neoplastická progrese je ovlivněna spíše rychlostí buněčné proliferace než proliferační aktivitou jako takovou.

Ačkoli barvení AgNOR a kvantifikace AgNOR jsou cenné metody při histopatologickém hodnocení malignit, s touto technikou jsou spojena i určitá omezení. Mezi takové nedostatky související s AgNOR patří nukleolární afinita ke stříbrným skvrnám, které zakrývají jednotlivé AgNOR v případech intenzivního barvení, překrývání různého stupně mezi nádory vysokého a nízkého stupně, potíže s rozpoznáním dubletů nebo shluků pomocí světelné mikroskopie, chybně interpretované usazování skvrn jako proliferační aktivita spolu s některými technické problémy barvení a fixace.

Barvení Methyl Green Pyronin (MGP) je diferenciální barvivo používané pro selektivní barvení DNA a RNA. Methylová zeleň se specificky váže na deoxyribonukleovou kyselinu (DNA), barví jádra zeleně, zatímco pyronin je specifický pro ribonukleovou kyselinu (RNA), barví jádra červeně. K rozlišení mezi proliferujícími a dediferencovanými neproliferujícími buněčnými jádry bylo také použito barvení methylovou zelenou pyroninovou barvou. Podobně pro hodnocení degradace DNA ve folikulárních epiteliálních buňkách štítné žlázy se toto barvivo také ukázalo jako užitečné.

Morfometrie byla významným pokrokem při vymezování sledu událostí odpovědných za progresi rakoviny. Variace ve velikosti a tvaru jádra a buněk mají větší důsledky při hodnocení neoplastických lézí. Barvení Methyl Green Pyronin (MGP) v poslední době přitahuje pozornost, protože se používá k hodnocení různých jaderných morfometrických parametrů u novotvarů prsu. Použitím barvení methylovou zelení-pyroninem lze nejen snížit nedostatky spojené s barvením AgNOR, ale také dosáhnout morfometrických parametrů pro hodnocení změn v jádře a jadérku během karcinogeneze.

Barvení AgNOR se zatím jeví jako užitečný diagnostický nástroj u spinocelulárního karcinomu dutiny ústní pro vyšetření nukleolární struktury a variací v nukleolární aktivitě. Na druhé straně bylo MGP barvení použito při hodnocení rakovinných lézí prsu a štítné žlázy a nedávno bylo rozšířeno na orální léze. Dosud však nebyly provedeny žádné studie, které by vyhodnotily a porovnaly morfometrické parametry pomocí těchto dvou barviv v rámci normálního orálního epitelu a orálního spinocelulárního karcinomu. Podobně bylo provedeno velmi málo studií týkajících se aplikace barviva methylovou zelenou pyroninovou barvou u orálních patologií.

Proto byla současná studie naplánována tak, aby vyhodnotila morfometrické parametry mezi normálním orálním epitelem a orálním spinocelulárním karcinomem pomocí barvení methylovou zelení pyroninem; tyto nálezy budou navíc také porovnány s nálezy z barvení AgNOR. V tomto současném scénáři může jít barvení pyroninem methylovou zelenou a morfometrická analýza ruku v ruce s cílem zajistit lepší diagnostiku a včasnou detekci rakoviny ústní dutiny.