Sammenligning av morfometrisk vurdering ved bruk av metylgrønt pyronin og AgNOR-farging av oral plateepitelkarsinom (OSCC)

Oral cancer, et stort globalt helseproblem, har den sjette posisjonen på verdensbasis med en markant variasjon i dens geografiske fordeling. Den er rangert som den tredje hyppigste kreften i utviklingsland etter mage- og livmorhalskreft. Blant orale kreftformer utgjør oral plateepitelkarsinom over 90 % av tilfellene.

Ut av utviklingsfylkene utgjør Indo-Pak-subkontinentet en tredjedel av den globale munnkreftbyrden. Karsinom i munnhulen i Pakistan, et av høyrisikolandene, er den nest hyppigste kreftformen hos begge kjønn. Med differensiell fordeling blant underpopulasjoner representerer det 8,8 % av alle rapporterte krefttilfeller. De mest dominerende risikofaktorene inkluderer tobakksrøyking, beteltygging og alkohol.

Screening og spesifikke diagnostiske verktøy er to innovative tilnærminger for tidlig påvisning av munnhulekreft. Konvensjonell oral undersøkelse og klinisk evaluering er fortsatt grunnlaget for screeningtilnærminger, mens kirurgisk biopsi etterfulgt av histologisk analyse tilskrives å være gullstandarden for diagnostisering av ondartede orale lesjoner. Videre kan noen tilleggsteknikker bidra til diagnostisering av munnhulekreft. Av disse vitale fargingen er DNA-analyse, kjemiluminescens, vevsfluorescens, lysbaserte deteksjonssystemer og biomarkører nå i forkant.

Biomarkører har vært verdifulle for å avsløre tilleggsinformasjon om tumorpatologi, inkludert inaktivering av tumorsuppressorgener, angiogenese, apoptose og celleproliferasjon. Avvik i proliferasjonskinetikk er den mest avgjørende faktoren under tumorprogresjon. Tre hovedkategorier av celleproliferasjonsmarkører inkluderer vekstfraksjonsmarkører som Ki67, syklusspesifikke markører som PCNA (Proliferating Cellular Nuclear Antigen), og cellesyklustidsmarkører som AgNOR. Under malignitet styres proliferasjon og proteinsyntese hovedsakelig av kjernen.

Nucleolar Organizer Regions (NOR) er løkker av DNA på de korte armene til akrosentriske kromosomer som antagelig er assosiert med celleproliferasjon. Noen av NOR-assosierte proteiner er argyrofile og kan demonstreres som svarte prikker ved hjelp av sølvfargingsteknikken, og strukturene som er demonstrert på denne måten er kjent som AgNOR-er. AgNOR kvantitative parametere gir informasjon om hastigheten på celleproliferasjon under cellesyklus. Neoplastisk progresjon påvirkes mer av celleproliferasjonshastigheten, snarere enn den proliferative aktiviteten i seg selv.

Selv om AgNOR-farging og AgNOR-kvantifisering er verdifulle metoder i histopatologisk evaluering av maligniteter, har visse begrensninger også blitt assosiert med denne teknikken. Slike AgNOR-assosierte mangler inkluderer nukleolær affinitet for sølvflekker som skjuler de individuelle AgNOR-ene i tilfeller av intens farging, overlapping av variabel grad mellom høy- og lavgradige svulster, vanskeligheter med å skjelne dubletter eller klynger ved lysmikroskopi, feiltolket flekkavsetning som proliferativ aktivitet sammen med noen tekniske problemer med farging og fiksering.

Methyl Green Pyronin (MGP)-farging er en differensialfarging som brukes til selektiv farging av DNA og RNA. Metylgrønt binder seg spesifikt til deoksyribonukleinsyre (DNA), og farger kjerner grønne, mens pyronin er spesifikt for ribonukleinsyre (RNA), og farger nukleoler røde. Metylgrønn pyroninfarge har også blitt brukt for å skille mellom prolifererende og dedifferensierte ikke-prolifererende cellekjerner. Tilsvarende for å vurdere nedbrytningen av DNA i follikulære epitelceller i skjoldbruskkjertelen, har denne flekken også vist seg å være nyttig.

Morfometri har vært et betydelig fremskritt i å avgrense rekkefølgen av hendelser som er ansvarlige for kreftprogresjon. Variasjoner i nukleær og cellulær størrelse og form har større implikasjoner i vurderingen av neoplastiske lesjoner. Methyl Green Pyronin (MGP)-farge har vakt oppmerksomhet i den senere tid da den har blitt brukt til å evaluere forskjellige nukleære morfometriske parametere i brystneoplasmer. Ved å bruke metylgrønn-pyronin-farging kan ikke bare manglene forbundet med AgNOR-farging reduseres, men også de morfometriske parametrene for å evaluere endringer i kjernen og nukleolen under karsinogenese kan oppnås.

Så langt ser AgNOR-farging ut til å være et nyttig diagnostisk verktøy ved oral plateepitelkarsinom for undersøkelse av nukleolær struktur og variasjoner i nukleolær aktivitet. På den annen side har MGP-farging blitt brukt til å vurdere kreftlesjonene i bryst og skjoldbruskkjertel og har nylig blitt utvidet til orale lesjoner. Det er imidlertid ennå ikke utført studier for å evaluere og sammenligne de morfometriske parametrene ved bruk av disse to flekkene innenfor normalt oralt epitel og oralt plateepitelkarsinom. Tilsvarende har svært få studier blitt utført angående bruk av metylgrønn pyronin-flekk i orale patologier.

Derfor er den nåværende studien planlagt for å evaluere de morfometriske parameterne blant normalt oralt epitel og oralt plateepitelkarsinom ved bruk av metylgrønn pyroninfarging; dessuten vil disse funnene også bli sammenlignet med de av AgNOR-farging. I dette nåværende scenariet kan metylgrønn pyroninfarging og morfometrisk analyse gå hånd i hånd for å gi en bedre diagnose og tidlig oppdagelse av oral kreft.