Confronto della valutazione morfometrica utilizzando la colorazione verde metile pironina e AgNOR del carcinoma a cellule squamose orale (OSCC)

Il cancro orale, uno dei principali problemi di salute globale, detiene la sesta posizione a livello mondiale con una marcata variazione nella sua distribuzione geografica. È classificato come il terzo tumore più frequente nel mondo in via di sviluppo dopo i tumori dello stomaco e del collo dell'utero. Tra i tumori orali, il carcinoma orale a cellule squamose rappresenta oltre il 90% dei casi.

Al di fuori delle contee in via di sviluppo, il subcontinente indo-pakistano rappresenta un terzo del carico globale di cancro orale. Il carcinoma del cavo orale in Pakistan, uno dei paesi ad alto rischio, è il secondo tumore più frequente in entrambi i sessi. Con una distribuzione differenziale tra le sottopopolazioni, rappresenta l'8,8% di tutti i casi di cancro segnalati. I fattori di rischio più predominanti includono il fumo di tabacco, la masticazione di betel e l'alcool.

Screening e strumenti diagnostici specifici sono due approcci innovativi per la diagnosi precoce del cancro orale. L'esame orale convenzionale e la valutazione clinica rimangono il fondamento degli approcci di screening, mentre la biopsia chirurgica seguita dall'analisi istologica è considerata il gold standard per la diagnosi di lesioni orali maligne. Inoltre, alcune tecniche aggiuntive possono contribuire alla diagnosi del cancro orale. Di queste colorazioni vitali, analisi del DNA, chemiluminescenza, fluorescenza tissutale, sistemi di rilevamento basati sulla luce e biomarcatori sono ora in prima linea.

I biomarcatori sono stati preziosi nel rivelare ulteriori informazioni sulla patologia tumorale, tra cui l'inattivazione dei geni oncosoppressori, l'angiogenesi, l'apoptosi e la proliferazione cellulare. Le aberrazioni nella cinetica di proliferazione sono il fattore più importante durante la progressione del tumore. Tre categorie principali di marcatori di proliferazione cellulare includono marcatori della frazione di crescita come Ki67, marcatori specifici del ciclo come PCNA (Prolifeating Cellular Nuclear Antigen) e marcatori del tempo del ciclo cellulare come AgNOR. Durante la malignità, la proliferazione e la sintesi proteica sono principalmente controllate dal nucleo.

Le regioni organizzatrici nucleolari (NOR) sono anelli di DNA sui bracci corti dei cromosomi acrocentrici che presumibilmente sono associati alla proliferazione cellulare. Alcune delle proteine ​​associate a NOR sono argirofile e possono essere dimostrate come punti neri mediante la tecnica di colorazione dell'argento e le strutture così dimostrate sono note come AgNOR. I parametri quantitativi AgNOR forniscono informazioni sulla velocità di proliferazione cellulare durante il ciclo cellulare. La progressione neoplastica è influenzata maggiormente dal tasso di proliferazione cellulare, piuttosto che dall'attività proliferativa in sé.

Sebbene la colorazione AgNOR e la quantificazione AgNOR siano metodi preziosi nella valutazione istopatologica delle neoplasie, a questa tecnica sono state associate anche alcune limitazioni. Tali carenze associate ad AgNOR includono l'affinità nucleolare per la colorazione d'argento che oscura i singoli AgNOR in caso di colorazione intensa, sovrapposizione di grado variabile tra tumori di alto e basso grado, difficoltà nel discernere doppiette o grappoli mediante microscopia ottica, deposizione di macchie interpretate erroneamente come attività proliferativa insieme ad alcune problemi tecnici di colorazione e fissazione.

La colorazione Methyl Green Pyronin (MGP) è una colorazione differenziale utilizzata per la colorazione selettiva di DNA e RNA. Il verde metile si lega specificamente all'acido desossiribonucleico (DNA), colorando i nuclei in verde, mentre la pironina è specifica per l'acido ribonucleico (RNA), colorando i nucleoli in rosso. La macchia di pironina verde metile è stata utilizzata anche per distinguere tra nuclei cellulari proliferanti e dedifferenziati non proliferanti. Analogamente per valutare la degradazione del DNA nelle cellule epiteliali follicolari tiroidee, anche questa colorazione si è dimostrata utile.

La morfometria è stata un progresso significativo nel delineare la sequenza di eventi responsabili della progressione del cancro. Le variazioni nelle dimensioni e nella forma nucleare e cellulare hanno maggiori implicazioni nella valutazione delle lesioni neoplastiche. La colorazione Methyl Green Pyronin (MGP) ha attirato l'attenzione negli ultimi tempi in quanto è stata utilizzata per valutare vari parametri morfometrici nucleari nelle neoplasie mammarie. Utilizzando la colorazione verde metile-pironina, è possibile ridurre non solo le inadeguatezze associate alla colorazione AgNOR, ma anche i parametri morfometrici per valutare i cambiamenti nel nucleo e nel nucleolo durante la cancerogenesi.

Finora la colorazione AgNOR sembra essere un utile strumento diagnostico nel carcinoma a cellule squamose orale per l'esame della struttura nucleolare e le variazioni dell'attività nucleolare. D'altra parte, la colorazione MGP è stata utilizzata nella valutazione delle lesioni cancerose della ghiandola mammaria e tiroidea e recentemente è stata estesa alle lesioni orali. Tuttavia, non sono stati ancora intrapresi studi per valutare e confrontare i parametri morfometrici utilizzando queste due macchie all'interno dell'epitelio orale normale e del carcinoma a cellule squamose orale. Allo stesso modo, sono stati intrapresi pochissimi studi sull'applicazione del colorante verde di metile pironina nelle patologie orali.

Quindi l'attuale studio è stato pianificato per valutare i parametri morfometrici tra epitelio orale normale e carcinoma a cellule squamose orali utilizzando la colorazione con pironina verde metile; inoltre questi risultati saranno confrontati anche con quelli della colorazione con AgNOR. In questo scenario attuale, la colorazione della pironina verde metile e l'analisi morfometrica possono andare di pari passo per fornire una diagnosi migliore e una diagnosi precoce del cancro orale.