Porównanie oceny morfometrycznej za pomocą barwienia zielenią metylową pironiny i AgNOR raka płaskonabłonkowego jamy ustnej (OSCC)

Rak jamy ustnej, główny globalny problem zdrowotny, zajmuje szóste miejsce na świecie z wyraźnymi różnicami w rozmieszczeniu geograficznym. W krajach rozwijających się zajmuje trzecie miejsce pod względem częstości występowania nowotworu, po raku żołądka i raku szyjki macicy. Wśród nowotworów jamy ustnej rak płaskonabłonkowy jamy ustnej stanowi ponad 90% przypadków.

Spośród rozwijających się hrabstw subkontynent Indo-Pak odpowiada za jedną trzecią globalnego obciążenia rakiem jamy ustnej. Rak jamy ustnej w Pakistanie, jednym z krajów wysokiego ryzyka, jest drugim najczęściej występującym nowotworem u obu płci. Przy zróżnicowanym rozkładzie wśród subpopulacji stanowi 8,8% wszystkich zgłoszonych przypadków raka. Najbardziej dominującymi czynnikami ryzyka są palenie tytoniu, żucie betelu i alkohol.

Badania przesiewowe i specjalne narzędzia diagnostyczne to dwa innowacyjne podejścia do wczesnego wykrywania raka jamy ustnej. Konwencjonalne badanie jamy ustnej i ocena kliniczna pozostają podstawą metod przesiewowych, podczas gdy biopsja chirurgiczna, po której następuje analiza histologiczna, jest uznawana za złoty standard w rozpoznawaniu złośliwych zmian w jamie ustnej. Ponadto niektóre techniki wspomagające mogą przyczynić się do rozpoznania raka jamy ustnej. Spośród tych istotnych barwienia, analiza DNA, chemiluminescencja, fluorescencja tkanek, systemy wykrywania oparte na świetle i biomarkery są obecnie na pierwszym planie.

Biomarkery były cenne w ujawnianiu dodatkowych informacji na temat patologii nowotworów, w tym inaktywacji genów supresorowych nowotworów, angiogenezy, apoptozy i proliferacji komórek. Aberracje w kinetyce proliferacji są najważniejszym czynnikiem podczas progresji nowotworu. Trzy główne kategorie markerów proliferacji komórkowej obejmują markery frakcji wzrostu, takie jak Ki67, markery specyficzne dla cyklu, takie jak PCNA (Proliferating Cellular Nuclear Antigen) oraz markery czasu cyklu komórkowego, takie jak AgNOR. Podczas choroby nowotworowej proliferacja i synteza białek są kontrolowane głównie przez jądro.

Jądrowe regiony organizatora (NOR) to pętle DNA na krótkich ramionach akrocentrycznych chromosomów, które przypuszczalnie są związane z proliferacją komórek. Niektóre białka związane z NOR są argyrofilne i można je wykazać jako czarne kropki techniką barwienia srebrem, a przedstawione w ten sposób struktury są znane jako AgNOR. Parametry ilościowe AgNOR dostarczają informacji o szybkości proliferacji komórek podczas cyklu komórkowego. Na progresję nowotworu większy wpływ ma szybkość proliferacji komórek niż sama aktywność proliferacyjna.

Chociaż barwienie AgNOR i oznaczanie ilościowe AgNOR są cennymi metodami w ocenie histopatologicznej nowotworów złośliwych, z tą techniką wiążą się również pewne ograniczenia. Takie niedociągnięcia związane z AgNOR obejmują powinowactwo jąderkowe do barwienia srebrem zasłaniające poszczególne AgNOR w przypadkach intensywnego barwienia, nakładanie się w różnym stopniu między guzami o wysokim i niskim stopniu złośliwości, trudności w rozróżnianiu dubletów lub skupisk za pomocą mikroskopii świetlnej, błędnie interpretowane osadzanie się barwnika jako aktywność proliferacyjna wraz z niektórymi techniczne problemy barwienia i utrwalania.

Barwnik pironiną zieleni metylowej (MGP) jest barwnikiem różnicującym stosowanym do selektywnego barwienia DNA i RNA. Zieleń metylowa wiąże się specyficznie z kwasem dezoksyrybonukleinowym (DNA), barwiąc jądra na zielono, podczas gdy pironina jest specyficzna dla kwasu rybonukleinowego (RNA), barwiąc jąderka na czerwono. Barwienie zielenią metylową pironiną było również używane do rozróżniania proliferujących i odróżnicowanych nieproliferujących jąder komórkowych. Podobnie jak w przypadku oceny degradacji DNA w komórkach nabłonka pęcherzyków tarczycy, barwienie to również okazało się przydatne.

Morfometria była znaczącym postępem w wyznaczaniu sekwencji zdarzeń odpowiedzialnych za progresję raka. Różnice w wielkości i kształcie jąder i komórek mają większe implikacje w ocenie zmian nowotworowych. Barwienie zielenią metylową i pironiną (MGP) w ostatnim czasie przyciąga uwagę, ponieważ jest wykorzystywane do oceny różnych parametrów morfometrycznych jądra w nowotworach piersi. Stosując barwienie zielenią metylową-pironiną, można nie tylko zmniejszyć niedoskonałości związane z barwieniem AgNOR, ale także uzyskać parametry morfometryczne do oceny zmian w jądrze i jąderku podczas karcynogenezy.

Jak dotąd barwienie AgNOR wydaje się być użytecznym narzędziem diagnostycznym w raku płaskonabłonkowym jamy ustnej do badania struktury jąderka i zmian w aktywności jąderka. Z drugiej strony barwienie MGP było stosowane w ocenie zmian nowotworowych piersi i tarczycy, a ostatnio zostało rozszerzone na zmiany w jamie ustnej. Jednak nie podjęto jeszcze żadnych badań w celu oceny i porównania parametrów morfometrycznych przy użyciu tych dwóch barwników w obrębie prawidłowego nabłonka jamy ustnej i raka płaskonabłonkowego jamy ustnej. Podobnie, przeprowadzono bardzo niewiele badań dotyczących zastosowania barwnika zielenią metylową z pironiną w patologiach jamy ustnej.

Dlatego obecne badanie zostało zaplanowane w celu oceny parametrów morfometrycznych normalnego nabłonka jamy ustnej i raka płaskonabłonkowego jamy ustnej przy użyciu barwienia zielenią metylową pironiny; ponadto wyniki te zostaną również porównane z wynikami barwienia AgNOR. W tym obecnym scenariuszu barwienie zielenią metylową pironiny i analiza morfometryczna mogą iść w parze, aby zapewnić lepszą diagnozę i wczesne wykrycie raka jamy ustnej.