Metyylivihreän pyroniinin ja suun levyepiteelikarsinooman AgNOR-värjäyksen morfometrisen arvioinnin vertailu (OSCC)

Suun syöpä, suuri maailmanlaajuinen terveysongelma, on kuudentena sijalla maailmanlaajuisesti, ja sen maantieteellinen jakautuminen vaihtelee huomattavasti. Se on kolmanneksi yleisin syöpä kehitysmaissa maha- ja kohdunkaulasyövän jälkeen. Suun syövistä yli 90 % tapauksista on suun okasolusyöpä.

Kehitysmaista Indo-Pakin niemimaan osuus on kolmannes maailman suusyöpätaakasta. Suun karsinooma Pakistanissa, joka on yksi korkean riskin maista, on toiseksi yleisin syöpä kummassakaan sukupuolessa. Alapopulaatioiden välisellä erolla se edustaa 8,8 % kaikista raportoiduista syöpätapauksista. Tärkeimpiä riskitekijöitä ovat tupakointi, betelin pureskelu ja alkoholi.

Seulonta ja erityiset diagnostiset työkalut ovat kaksi innovatiivista lähestymistapaa suun syövän varhaiseen havaitsemiseen. Perinteinen suututkimus ja kliininen arviointi ovat edelleen seulontamenetelmien perusta, kun taas kirurgisen biopsian ja sitä seuraavan histologisen analyysin katsotaan olevan kultainen standardi pahanlaatuisten suun leesioiden diagnosoinnissa. Lisäksi jotkin lisätekniikat voivat edistää suun syövän diagnosointia. Näistä elintärkeistä värjäyksistä DNA-analyysi, kemiluminesenssi, kudosfluoresenssi, valopohjaiset tunnistusjärjestelmät ja biomarkkerit ovat nyt eturintamassa.

Biomarkkerit ovat olleet arvokkaita paljastaessaan lisätietoa kasvainpatologiasta, mukaan lukien kasvaimen suppressorigeenien inaktivaatio, angiogeneesi, apoptoosi ja solujen lisääntyminen. Proliferaatiokinetiikan poikkeamat ovat välttämättömin tekijä kasvaimen etenemisen aikana. Soluproliferaatiomarkkerien kolme pääluokkaa sisältävät kasvufraktiomarkkerit, kuten Ki67, syklispesifiset markkerit, kuten PCNA (Proliferating Cellular Nuclear Antigen), ja solusyklin aikamerkit, kuten AgNOR. Pahanlaatuisuuden aikana proliferaatiota ja proteiinisynteesiä säätelee pääasiassa tuma.

Nukleolaariset järjestäjäalueet (NOR) ovat DNA-silmukoita akrosentristen kromosomien lyhyissä käsivarsissa, jotka oletettavasti liittyvät solujen lisääntymiseen. Jotkut NOR-assosioituneista proteiineista ovat argyrofiilisiä ja ne voidaan osoittaa mustina pisteinä hopeavärjäystekniikalla, ja näin esitellyt rakenteet tunnetaan AgNORina. Kvantitatiiviset AgNOR-parametrit antavat tietoa solujen lisääntymisen nopeudesta solusyklin aikana. Neoplastiseen etenemiseen vaikuttaa enemmän solujen lisääntymisen nopeus kuin proliferatiivinen aktiivisuus sinänsä.

Vaikka AgNOR-värjäys ja AgNOR-kvantifiointi ovat arvokkaita menetelmiä pahanlaatuisten kasvainten histopatologisessa arvioinnissa, tiettyjä rajoituksia on myös liitetty tähän tekniikkaan. Tällaisia ​​AgNORiin liittyviä puutteita ovat mm. nukleolaarinen affiniteetti hopeavärjäykseen, joka peittää yksittäiset AgNOR:t voimakkaan värjäytymisen tapauksissa, vaihtelevan asteinen päällekkäisyys korkea- ja matala-asteisten kasvaimien välillä, vaikeudet erottaa kaksoiskappaleita tai klustereita valomikroskopialla, väärin tulkittu tahrojen kerääntyminen sekä jonkinlainen proliferatiivinen aktiivisuus. värjäytymisen ja kiinnityksen tekniset ongelmat.

Methyl Green Pyronin (MGP) -värjäys on differentiaalivärjäys, jota käytetään DNA:n ja RNA:n selektiiviseen värjäämiseen. Metyylivihreä sitoutuu spesifisesti deoksiribonukleiinihappoon (DNA) ja värjää ytimet vihreäksi, kun taas pyroniini on spesifinen ribonukleiinihapolle (RNA:lle) värjäämällä nukleolit ​​punaisiksi. Metyylivihreää pyroniiniväriä on myös käytetty erottamaan proliferoituvat ja erilaistumattomat ei-proliferoituvat soluytimet. Samoin kilpirauhasen follikulaaristen epiteelisolujen DNA:n hajoamisen arvioimiseksi tämä värjäys on myös osoittautunut käyttökelpoiseksi.

Morfometria on ollut merkittävä edistysaskel syövän etenemisestä vastuussa olevien tapahtumien sekvenssin määrittämisessä. Tuman ja solun koon ja muodon vaihteluilla on suurempi merkitys kasvainvaurioiden arvioinnissa. Metyylivihreä Pyronin (MGP) -väri on herättänyt huomiota viime aikoina, koska sitä on käytetty erilaisten ydinmorfometristen parametrien arvioimiseen rintakasvaimissa. Käyttämällä metyylivihreä-pyroniinivärjäystä, ei ainoastaan ​​AgNOR-värjäytymiseen liittyviä puutteita voida vähentää, vaan myös morfometrisiä parametreja ytimessä ja ytimessä karsinogeneesin aikana tapahtuvien muutosten arvioimiseksi voidaan saavuttaa.

Toistaiseksi AgNOR-värjäys näyttää olevan hyödyllinen diagnostinen työkalu suun levyepiteelikarsinoomassa nukleolaarisen rakenteen ja nukleolaarisen aktiivisuuden vaihteluiden tutkimiseksi. Toisaalta MGP-värjäystä on käytetty rintojen ja kilpirauhasen syöpävaurioiden arvioinnissa, ja viime aikoina se on laajennettu suuvaurioihin. Mitään tutkimuksia ei kuitenkaan ole vielä tehty morfometristen parametrien arvioimiseksi ja vertaamiseksi käyttämällä näitä kahta värjäystä normaalissa suun epiteelissä ja suun levyepiteelissä. Samoin hyvin vähän tutkimuksia on tehty metyylivihreän pyroniinivärin levittämisestä suun patologioissa.

Tästä syystä nykyinen tutkimus on suunniteltu arvioimaan normaalin suun epiteelin ja suun levyepiteelin morfometrisiä parametreja käyttämällä metyylivihreä pyroniinivärjäystä; Lisäksi näitä löydöksiä verrataan myös AgNOR-värjäyksen tuloksiin. Tässä nykyisessä skenaariossa metyylivihreä pyroniinivärjäys ja morfometrinen analyysi voivat kulkea käsi kädessä suun syövän paremman diagnoosin ja varhaisen havaitsemisen varmistamiseksi.