Jämförelse av morfometrisk bedömning med användning av metylgrönt pyronin och AgNOR-färgning av oral skivepitelcancer (OSCC)

Oral cancer, ett stort globalt hälsoproblem, har den sjätte positionen världen över med en markant variation i dess geografiska spridning. Den rankas som den tredje vanligaste cancern i utvecklingsländerna efter mag- och livmoderhalscancer. Bland orala cancerformer står skivepitelcancer i munhålan för över 90 % av fallen.

Av utvecklingslänen uppgår Indo-Pak-subkontinenten till en tredjedel av den globala muncancerbördan. Cancer i munhålan i Pakistan, ett av högriskländerna, är den näst vanligaste cancerformen hos båda könen. Med differentiell fördelning mellan subpopulationer representerar den 8,8 % av alla rapporterade cancerfall. De mest dominerande riskfaktorerna inkluderar tobaksrökning, beteltuggning och alkohol.

Screening och specifika diagnostiska verktyg är två innovativa metoder för tidig upptäckt av oral cancer. Konventionell oral undersökning och klinisk utvärdering förblir grunden för screeningmetoder, medan kirurgisk biopsi följt av histologisk analys anses vara guldstandarden för att diagnostisera maligna orala lesioner. Dessutom kan vissa tilläggstekniker bidra till diagnosen oral cancer. Av dessa livsviktiga färgningar är nu DNA-analys, kemiluminescens, vävnadsfluorescens, ljusbaserade detektionssystem och biomarkörer i framkant.

Biomarkörer har varit värdefulla för att avslöja ytterligare information om tumörpatologi, inklusive inaktivering av tumörsuppressorgener, angiogenes, apoptos och cellproliferation. Avvikelser i proliferationskinetiken är den mest nödvändiga faktorn under tumörprogression. Tre huvudkategorier av cellproliferationsmarkörer inkluderar tillväxtfraktionsmarkörer som Ki67, cykelspecifika markörer som PCNA (Proliferating Cellular Nuclear Antigen) och cellcykeltidsmarkörer som AgNOR. Under malignitet styrs proliferation och proteinsyntes huvudsakligen av kärnan.

Nucleolar Organizer Regions (NOR) är öglor av DNA på de korta armarna av akrocentriska kromosomer som förmodligen är associerade med cellproliferation. Vissa av NOR-associerade proteiner är argyrofila och kan demonstreras som svarta prickar med silverfärgningstekniken och de strukturer som sålunda demonstreras är kända som AgNOR. AgNOR kvantitativa parametrar ger information om cellproliferationshastigheten under cellcykeln. Neoplastisk progression påverkas mer av cellproliferationshastigheten snarare än den proliferativa aktiviteten i sig.

Även om AgNOR-färgning och AgNOR-kvantifiering är värdefulla metoder för histopatologisk utvärdering av maligniteter, har vissa begränsningar också associerats med denna teknik. Sådana AgNOR-associerade brister inkluderar nukleolär affinitet för silverfärgning som skymmer de individuella AgNOR:erna i fall av intensiv färgning, överlappning av varierande grad mellan hög- och låggradiga tumörer, svårigheter att urskilja dubbletter eller kluster genom ljusmikroskopi, feltolkad fläckavsättning som proliferativ aktivitet tillsammans med vissa tekniska problem med färgning och fixering.

Methyl Green Pyronin (MGP) färg är en differentialfärgning som används för selektiv färgning av DNA och RNA. Metylgrönt binder specifikt till deoxiribonukleinsyra (DNA), färgar kärnorna gröna, medan pyronin är specifikt för ribonukleinsyra (RNA), färgar nukleolerna röda. Metylgrön pyroninfärgning har också använts för att skilja mellan prolifererande och dedifferentierade icke-prolifererande cellkärnor. På liknande sätt för att bedöma nedbrytningen av DNA i follikulära epitelceller i sköldkörteln har denna färg också visat sig vara användbar.

Morfometri har varit ett betydande framsteg när det gäller att avgränsa sekvensen av händelser som är ansvariga för cancerprogression. Variationer i nukleär och cellulär storlek och form har större implikationer vid bedömningen av neoplastiska lesioner. Methyl Green Pyronin (MGP)-färgning har rönt uppmärksamhet på senare tid eftersom den har använts för att utvärdera olika nukleära morfometriska parametrar i bröstneoplasmer. Genom att använda metylgrön-pyroninfärgning kan inte bara otillräckligheterna förknippade med AgNOR-färgning minskas utan även de morfometriska parametrarna för att utvärdera förändringar i kärnan och nukleolus under karcinogenesen kan uppnås.

Än så länge verkar AgNOR-färgning vara ett användbart diagnostiskt verktyg vid oral skivepitelcancer för undersökning av nukleolär struktur och variationer i nukleolär aktivitet. Å andra sidan har MGP-färgning använts för att bedöma cancerskador i bröst och sköldkörtel och har nyligen utvidgats till orala lesioner. Det har dock ännu inte gjorts några studier för att utvärdera och jämföra de morfometriska parametrarna med dessa två färger inom normalt oralt epitel och oralt skivepitelcancer. På liknande sätt har mycket få studier genomförts angående applicering av metylgrön pyroninfärgning i orala patologier.

Därför har den aktuella studien planerats för att utvärdera de morfometriska parametrarna bland normalt oralt epitel och oralt skivepitelcancer med användning av metylgrön pyroninfärgning; dessutom kommer dessa fynd också att jämföras med de av AgNOR-färgning. I detta aktuella scenario kan metylgrön pyroninfärgning och morfometrisk analys gå hand i hand för att ge en bättre diagnos och tidig upptäckt av oral cancer.