Sammenligning af morfometrisk vurdering ved brug af methylgrøn pyronin og AgNOR-farvning af oral pladecellecarcinom (OSCC)

Oral cancer, et stort globalt sundhedsproblem, indtager den sjette position på verdensplan med en markant variation i dens geografiske fordeling. Det er rangeret som den tredje hyppigste kræftsygdom i udviklingslandene efter mave- og livmoderhalskræft. Blandt orale kræftformer tegner oral pladecellekarcinom sig for over 90 % af tilfældene.

Ud af udviklingslandene udgør Indo-Pak-subkontinentet en tredjedel af den globale orale cancerbyrde. Karcinom i mundhulen i Pakistan, et af højrisikolandene, er den næsthyppigste kræftsygdom hos begge køn. Med differentiel fordeling blandt underpopulationer repræsenterer det 8,8 % af alle rapporterede kræfttilfælde. De mest fremherskende risikofaktorer omfatter tobaksrygning, beteltygning og alkohol.

Screening og specifikke diagnostiske værktøjer er to innovative tilgange til tidlig påvisning af oral cancer. Konventionel mundtlig undersøgelse og klinisk evaluering er fortsat grundlaget for screeningsmetoder, hvorimod kirurgisk biopsi efterfulgt af histologisk analyse tilskrives den gyldne standard for diagnosticering af maligne orale læsioner. Desuden kan nogle supplerende teknikker bidrage til diagnosticering af oral cancer. Af disse vitale farvninger er DNA-analyse, kemiluminescens, vævsfluorescens, lysbaserede detektionssystemer og biomarkører nu på forkant.

Biomarkører har været værdifulde til at afsløre yderligere information om tumorpatologi, herunder inaktivering af tumorsuppressorgener, angiogenese, apoptose og celleproliferation. Afvigelser i proliferationskinetik er den mest afgørende faktor under tumorprogression. Tre hovedkategorier af celleproliferationsmarkører inkluderer vækstfraktionsmarkører som Ki67, cyklusspecifikke markører som PCNA (Proliferating Cellular Nuclear Antigen) og cellecyklustidsmarkører som AgNOR. Under malignitet styres proliferation og proteinsyntese hovedsageligt af kernen.

Nucleolar Organizer Regions (NOR'er) er sløjfer af DNA på de korte arme af akrocentriske kromosomer, der formodentlig er forbundet med celleproliferation. Nogle af de NOR-associerede proteiner er argyrofile og kan påvises som sorte prikker ved sølvfarvningsteknikken, og de således demonstrerede strukturer er kendt som AgNOR'er. AgNOR kvantitative parametre giver information om hastigheden af ​​celleproliferation under cellecyklus. Neoplastisk progression påvirkes mere af celleproliferationshastigheden snarere end den proliferative aktivitet i sig selv.

Selvom AgNOR-farvning og AgNOR-kvantificering er værdifulde metoder til histopatologisk evaluering af maligniteter, er visse begrænsninger også blevet forbundet med denne teknik. Sådanne AgNOR-associerede mangler omfatter nukleolær affinitet for sølvfarvning, der skjuler de individuelle AgNOR'er i tilfælde af intens farvning, overlapning af variabel grad mellem høj- og lavgradige tumorer, vanskeligheder med at skelne dubletter eller klynger ved lysmikroskopi, fejlfortolket pletaflejring som proliferativ aktivitet sammen med nogle tekniske problemer med farvning og fiksering.

Methyl Green Pyronin (MGP) farvning er en differentiel farvning, der bruges til selektiv farvning af DNA og RNA. Methylgrøn binder specifikt til deoxyribonukleinsyre (DNA), og farver kerner grønne, mens pyronin er specifik for ribonukleinsyre (RNA), der farver nukleolerne røde. Methylgrøn pyroninfarvning er også blevet brugt til at skelne mellem prolifererende og dedifferentierede ikke-prolifererende cellekerner. Tilsvarende for at vurdere nedbrydningen af ​​DNA i skjoldbruskkirtelfollikulære epitelceller, har denne farvning også vist sig at være nyttig.

Morfometri har været et betydeligt fremskridt med hensyn til at afgrænse rækkefølgen af ​​hændelser, der er ansvarlige for cancerprogression. Variationer i nuklear og cellulær størrelse og form har større implikationer i vurderingen af ​​neoplastiske læsioner. Methyl Green Pyronin (MGP) farve har tiltrukket sig opmærksomhed i den seneste tid, da den er blevet brugt til at evaluere forskellige nukleare morfometriske parametre i brystneoplasmer. Ved at bruge methyl-grøn-pyronin-farvning kan ikke kun utilstrækkelighederne forbundet med AgNOR-farvning mindskes, men også de morfometriske parametre til evaluering af ændringer i kernen og nucleolus under carcinogenese kan opnås.

Indtil videre ser AgNOR-farvning ud til at være et nyttigt diagnostisk værktøj ved oral pladecellecarcinom til undersøgelse af nukleolær struktur og variationer i nukleolær aktivitet. På den anden side er MGP-farvning blevet brugt til at vurdere kræftlæsioner i bryst og skjoldbruskkirtel og er for nylig blevet udvidet til orale læsioner. Der er dog endnu ikke foretaget undersøgelser for at evaluere og sammenligne de morfometriske parametre ved brug af disse to farvninger inden for normalt oralt epitel og oralt pladecellecarcinom. På samme måde er der foretaget meget få undersøgelser vedrørende anvendelse af methylgrøn pyronin-farvning i orale patologier.

Derfor er den nuværende undersøgelse planlagt til at evaluere de morfometriske parametre blandt normalt oralt epitel og oralt pladecellecarcinom ved brug af methylgrøn pyroninfarvning; desuden vil disse fund også blive sammenlignet med dem ved AgNOR-farvning. I dette nuværende scenarie kan methylgrøn pyroninfarvning og morfometrisk analyse gå hånd i hånd for at give en bedre diagnose og tidlig påvisning af oral cancer.