Vergleich der morphometrischen Bewertung unter Verwendung von Methylgrünpyronin und AgNOR-Färbung von oralem Plattenepithelkarzinom (OSCC)

Mundkrebs, ein großes globales Gesundheitsproblem, nimmt weltweit den sechsten Platz ein, mit deutlichen Unterschieden in seiner geografischen Verbreitung. Es ist nach Magen- und Gebärmutterhalskrebs die dritthäufigste Krebsart in den Entwicklungsländern. Unter den oralen Krebserkrankungen macht das orale Plattenepithelkarzinom über 90 % der Fälle aus.

Von den Entwicklungsländern macht der Subkontinent Indo-Pak ein Drittel der weltweiten Mundkrebslast aus. Das Karzinom der Mundhöhle ist in Pakistan, einem der Hochrisikoländer, die zweithäufigste Krebsart bei beiden Geschlechtern. Mit einer unterschiedlichen Verteilung auf Teilpopulationen macht es 8,8 % aller gemeldeten Krebsfälle aus. Zu den vorherrschenden Risikofaktoren gehören Tabakrauchen, Betelkauen und Alkohol.

Screening und spezifische diagnostische Instrumente sind zwei innovative Ansätze zur Früherkennung von Mundkrebs. Die konventionelle orale Untersuchung und klinische Bewertung bleibt die Grundlage von Screening-Ansätzen, während die chirurgische Biopsie mit anschließender histologischer Analyse als Goldstandard für die Diagnose maligner oraler Läsionen angesehen wird. Darüber hinaus können einige zusätzliche Techniken zur Diagnose von Mundkrebs beitragen. Von diesen lebenswichtigen Färbungen stehen jetzt DNA-Analyse, Chemilumineszenz, Gewebefluoreszenz, lichtbasierte Detektionssysteme und Biomarker an vorderster Front.

Biomarker waren wertvoll, um zusätzliche Informationen über die Tumorpathologie aufzudecken, einschließlich der Inaktivierung von Tumorsuppressorgenen, Angiogenese, Apoptose und Zellproliferation. Aberrationen in der Proliferationskinetik sind der wichtigste Faktor während der Tumorprogression. Drei Hauptkategorien von Zellproliferationsmarkern umfassen Wachstumsfraktionsmarker wie Ki67, zyklusspezifische Marker wie PCNA (Proliferating Cellular Nuclear Antigen) und Zellzykluszeitmarker wie AgNOR. Während der Malignität wird die Proliferation und Proteinsynthese hauptsächlich vom Zellkern gesteuert.

Nukleoläre Organisatorregionen (NORs) sind DNA-Schleifen auf den kurzen Armen akrozentrischer Chromosomen, die vermutlich mit der Zellproliferation in Verbindung stehen. Einige der NOR-assoziierten Proteine ​​sind argyrophil und können durch die Silberfärbetechnik als schwarze Punkte nachgewiesen werden, und die so nachgewiesenen Strukturen sind als AgNORs bekannt. Die quantitativen AgNOR-Parameter geben Auskunft über die Geschwindigkeit der Zellproliferation während des Zellzyklus. Die neoplastische Progression wird eher durch die Zellproliferationsrate als durch die proliferative Aktivität an sich beeinflusst.

Obwohl AgNOR-Färbung und AgNOR-Quantifizierung wertvolle Methoden bei der histopathologischen Bewertung von Malignomen sind, wurden mit dieser Technik auch gewisse Einschränkungen in Verbindung gebracht. Zu solchen mit AgNOR verbundenen Mängeln gehören die nukleoläre Affinität für Silberfärbung, die die einzelnen AgNORs in Fällen intensiver Färbung verdeckt, Überlappung unterschiedlichen Grades zwischen hoch- und niedriggradigen Tumoren, Schwierigkeiten bei der Unterscheidung von Dubletts oder Clustern durch Lichtmikroskopie, fehlinterpretierte Farbstoffablagerung als proliferative Aktivität zusammen mit einigen technische Probleme der Färbung und Fixierung.

Methyl Green Pyronin (MGP)-Färbemittel ist ein differenzielles Färbemittel, das zum selektiven Färben von DNA und RNA verwendet wird. Methylgrün bindet spezifisch an Desoxyribonukleinsäure (DNA) und färbt Zellkerne grün, während Pyronin spezifisch für Ribonukleinsäure (RNA) ist und Nukleolen rot färbt. Methylgrün-Pyronin-Färbung wurde auch verwendet, um zwischen proliferierenden und dedifferenzierten nicht-proliferierenden Zellkernen zu unterscheiden. Auch zur Beurteilung des DNA-Abbaus in follikulären Epithelzellen der Schilddrüse hat sich diese Färbung bewährt.

Die Morphometrie war ein bedeutender Fortschritt bei der Beschreibung der Abfolge von Ereignissen, die für das Fortschreiten von Krebs verantwortlich sind. Variationen in Kern- und Zellgröße und -form haben größere Auswirkungen auf die Beurteilung neoplastischer Läsionen. Methylgrün-Pyronin (MGP)-Färbemittel hat in letzter Zeit Aufmerksamkeit erregt, da es verwendet wurde, um verschiedene kernmorphometrische Parameter in Brustneoplasmen zu bewerten. Durch die Verwendung der Methylgrün-Pyronin-Färbung können nicht nur die mit der AgNOR-Färbung verbundenen Unzulänglichkeiten verringert werden, sondern es können auch die morphometrischen Parameter zur Bewertung von Veränderungen im Kern und Nukleolus während der Karzinogenese erreicht werden.

Bisher scheint die AgNOR-Färbung ein nützliches diagnostisches Werkzeug beim oralen Plattenepithelkarzinom zur Untersuchung der nukleolären Struktur und Variationen der nukleolären Aktivität zu sein. Andererseits wurde die MGP-Färbung zur Beurteilung von krebsartigen Läsionen der Brust und der Schilddrüse verwendet und wurde kürzlich auf orale Läsionen ausgedehnt. Es wurden jedoch noch keine Studien durchgeführt, um die morphometrischen Parameter unter Verwendung dieser beiden Färbungen bei normalem oralem Epithel und oralem Plattenepithelkarzinom zu bewerten und zu vergleichen. In ähnlicher Weise wurden nur sehr wenige Studien zur Anwendung von Methylgrün-Pyronin-Färbemittel bei oralen Pathologien durchgeführt.

Daher ist die aktuelle Studie geplant, um die morphometrischen Parameter bei normalem oralem Epithel und oralem Plattenepithelkarzinom unter Verwendung von Methylgrün-Pyronin-Färbung zu bewerten; außerdem werden diese Befunde auch mit denen der AgNOR-Färbung verglichen. In diesem aktuellen Szenario können die Methylgrün-Pyronin-Färbung und die morphometrische Analyse Hand in Hand gehen, um eine bessere Diagnose und Früherkennung von Mundkrebs zu ermöglichen.