Сравнение морфометрической оценки с использованием метилового зеленого пиронина и окрашивания AgNOR плоскоклеточного рака полости рта (OSCC)

Рак полости рта, серьезная глобальная проблема здравоохранения, занимает шестое место в мире с заметными различиями в его географическом распространении. Он занимает третье место среди наиболее частых видов рака в развивающихся странах после рака желудка и рака шейки матки. Среди онкологических заболеваний ротовой полости плоскоклеточная карцинома полости рта составляет более 90% случаев.

Из развивающихся стран на субконтинент Индо-Пакистан приходится одна треть глобального бремени рака полости рта. Карцинома полости рта в Пакистане, одной из стран с высоким риском, является вторым наиболее частым видом рака у обоих полов. При дифференцированном распределении среди субпопуляций он составляет 8,8% всех зарегистрированных случаев рака. Наиболее распространенными факторами риска являются курение табака, жевание бетеля и алкоголь.

Скрининг и специальные диагностические инструменты являются двумя инновационными подходами к раннему выявлению рака ротовой полости. Обычное обследование полости рта и клиническая оценка остаются основой подходов к скринингу, в то время как хирургическая биопсия с последующим гистологическим анализом считается золотым стандартом диагностики злокачественных поражений полости рта. Кроме того, некоторые дополнительные методы могут способствовать диагностике рака ротовой полости. Из этих жизненно важных окрашиваний анализ ДНК, хемилюминесценция, флуоресценция тканей, системы обнаружения на основе света и биомаркеры в настоящее время находятся на переднем крае.

Биомаркеры оказались ценными для получения дополнительной информации об опухолевой патологии, включая инактивацию генов-супрессоров опухолей, ангиогенез, апоптоз и пролиферацию клеток. Нарушения в кинетике пролиферации являются наиболее важным фактором во время опухолевой прогрессии. Три основные категории маркеров клеточной пролиферации включают маркеры фракций роста, такие как Ki67, маркеры, специфичные для цикла, такие как PCNA (пролиферирующий клеточный ядерный антиген), и маркеры времени клеточного цикла, такие как AgNOR. При малигнизации пролиферация и синтез белка в основном контролируются ядром.

Районы ядрышковых организаторов (ЯОР) представляют собой петли ДНК на коротких плечах акроцентрических хромосом, которые предположительно связаны с пролиферацией клеток. Некоторые из белков, связанных с NOR, являются аргирофильными и могут быть продемонстрированы в виде черных точек с помощью метода окрашивания серебром, а продемонстрированные таким образом структуры известны как AgNOR. Количественные параметры AgNOR предоставляют информацию о скорости пролиферации клеток во время клеточного цикла. На неопластическую прогрессию больше влияет скорость пролиферации клеток, а не пролиферативная активность как таковая.

Хотя окрашивание AgNOR и количественная оценка AgNOR являются ценными методами гистопатологической оценки злокачественных новообразований, с этим методом также связаны определенные ограничения. Такие недостатки, связанные с Ag-ЯОР, включают ядрышковое сродство к окрашиванию серебром, затемняющее отдельные Ag-ЯОР в случаях интенсивного окрашивания, перекрывание различной степени между опухолями высокой и низкой степени злокачественности, трудности в различении дублетов или кластеров с помощью световой микроскопии, ошибочно интерпретируемое отложение красителя как пролиферативную активность наряду с некоторыми технические проблемы окрашивания и фиксации.

Окрашивание метиловым зеленым пиронином (MGP) — это дифференциальное окрашивание, используемое для селективного окрашивания ДНК и РНК. Метиловый зеленый специфически связывается с дезоксирибонуклеиновой кислотой (ДНК), окрашивая ядра в зеленый цвет, в то время как пиронин специфично связывается с рибонуклеиновой кислотой (РНК), окрашивая ядрышки в красный цвет. Окрашивание метиловым зеленым пиронином также использовалось для различения ядер пролиферирующих и дедифференцированных непролиферирующих клеток. Подобно оценке деградации ДНК в эпителиальных клетках фолликулов щитовидной железы, это окрашивание также оказалось полезным.

Морфометрия стала значительным шагом вперед в определении последовательности событий, ответственных за прогрессирование рака. Различия в размерах и форме ядер и клеток имеют большое значение для оценки неопластических поражений. Окрашивание метиловым зеленым пиронином (MGP) в последнее время привлекает внимание, поскольку его используют для оценки различных ядерных морфометрических параметров в новообразованиях молочной железы. Используя окрашивание метиловым зеленым пиронином, можно не только уменьшить недостатки, связанные с окрашиванием AgNOR, но также можно получить морфометрические параметры для оценки изменений в ядре и ядрышке во время канцерогенеза.

На сегодняшний день окрашивание AgNOR представляется полезным диагностическим инструментом при плоскоклеточном раке полости рта для изучения структуры ядрышка и вариаций активности ядрышка. С другой стороны, окрашивание MGP использовалось для оценки раковых поражений молочной железы и щитовидной железы и недавно было распространено на поражения полости рта. Тем не менее, еще не было проведено исследований для оценки и сравнения морфометрических параметров с использованием этих двух красителей в пределах нормального эпителия полости рта и плоскоклеточной карциномы полости рта. Точно так же было проведено очень мало исследований, касающихся применения красителя метилового зеленого пиронина при патологиях полости рта.

Следовательно, настоящее исследование было запланировано для оценки морфометрических параметров среди нормального эпителия полости рта и плоскоклеточной карциномы полости рта с использованием окрашивания метиловым зеленым пиронином; кроме того, эти результаты также будут сравниваться с результатами окрашивания AgNOR. В этом текущем сценарии окрашивание метиловым зеленым пиронином и морфометрический анализ могут идти рука об руку, чтобы обеспечить лучшую диагностику и раннее выявление рака полости рта.