Polymorfismus CYP 2C19 a minimální koncentrace vorikonazolu u dospělých čínských pacientů

Každý izolát aspergilózy bude získán z klinických vzorků (sputum, tekutina z bronchoalveolární laváže, tkáň plicní biopsie) a identifikace druhové úrovně bude také provedena v nemocnici Qilu pomocí konvenčních metod (jak makroskopických, tak mikroskopických charakteristik). Kmeny aspergilózy budou skladovány v 10% glycerolovém bujónu při -80 °C. In vitro test antimykotické citlivosti kmenů aspergilózy na vorikonazol bude proveden v Centru lékařské mykologie a mykóz, First Hospital, Peking University, a bude probíhat podle standardu Institutu klinických a laboratorních standardů (CLSI) mikrodiluce M38-A2 metody.

Test sérového galaktomannanu (GM) bude prováděn dvakrát týdně po dobu prvních dvou týdnů. Byl použit dvojitý sendvičový test ELISA GM. Hraniční hodnota indexu optické hustoty (ODI) >0,5 byla považována za pozitivní.

Hladiny vorikonazolu v séru budou měřeny 4., 7., 10. a 14. den (všechny minimální hladiny). Stručně řečeno, kvantitativní analýza vorikonazolu byla provedena pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie spojené s tandemovou hmotnostní spektrometrií.

Genotypizace CYP2C19 bude provedena pomocí 3 ml periferní krve odebrané do zkumavek s EDTA (kyselina ethylendiamintetraoctová) 4. den. Genomová DNA byla extrahována z krevních leukocytů pomocí soupravy pro extrakci DNA. Genotypizace byla potvrzena analýzou polymorfismu délky restrikčního fragmentu (RFLP) polymerázovou řetězovou reakcí (PCR). Jedince lze rozdělit do tří skupin podle genotypu CYP2C19. Ti, kteří zdědí dvě mutantní alely CYP2C19 (*2 a/nebo *3), mají sníženou schopnost metabolizovat substráty CYP2C19 a jsou definováni jako pomalí metabolizátoři (PM). Jedinci, kteří jsou homozygotní (*1/*1) pro divoký typ CYP2C19*1 nebo 1 alelu divokého typu a 1 CY¬P2C19*17 mají účinné enzymy pro metabolizaci substrátů CYP2C19 a jsou definováni jako extenzivní metabolizátoři (EM). Subjekty, které jsou heterozygotní (*1/*2, *1/*3) pro divoký typ CYP2C19*1, jsou definovány jako střední metabolizátoři (IM)