Polimorfizm CYP 2C19 i minimalne stężenie worykonazolu u dorosłych pacjentów z Chin

Każdy izolat aspergilozy zostanie pobrany z próbek klinicznych (plwociny, popłuczyn oskrzelowo-pęcherzykowych, tkanki z biopsji płuc), a identyfikacja poziomu gatunku zostanie również przeprowadzona w szpitalu Qilu przy użyciu konwencjonalnych metod (zarówno charakterystyka makroskopowa, jak i mikroskopowa). Szczepy aspergilozy będą przechowywane w 10% bulionie glicerolowym w -80°C. Test wrażliwości przeciwgrzybiczej in vitro szczepów aspergilozy na worykonazol zostanie przeprowadzony w Center for Medical Mycology and Mycoses, First Hospital, Peking University, a wykonanie będzie zgodne ze standardem mikrorozcieńczeń M38-A2 Instytutu Standardów Klinicznych i Laboratoryjnych (CLSI) metody.

Test galaktomannanu (GM) w surowicy będzie wykonywany dwa razy w tygodniu przez pierwsze dwa tygodnie. Zastosowano test podwójnej kanapki ELISA GM. Odcięcie wskaźnika gęstości optycznej (ODI) >0,5 przyjęto jako dodatnie.

Stężenia worykonazolu w surowicy będą mierzone w dniu 4, dniu 7, dniu 10 i dniu 14 (wszystkie minimalne stężenia). W skrócie, analizę ilościową worykonazolu przeprowadzono za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej połączonej z tandemową spektrometrią mas.

Genotypowanie CYP2C19 zostanie przeprowadzone przy użyciu 3 ml krwi obwodowej pobranej do probówek z EDTA (kwas etylenodiaminotetraoctowy) w dniu 4. Genomowy DNA ekstrahowano z leukocytów krwi za pomocą zestawu do ekstrakcji DNA. Genotypowanie potwierdzono metodą reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) z polimorfizmem długości fragmentów restrykcyjnych (RFLP). Osoby można podzielić na trzy grupy w zależności od genotypu CYP2C19. Osoby, które odziedziczyły dwa zmutowane allele CYP2C19 (*2 i/lub *3), mają zmniejszoną zdolność metabolizowania substratów CYP2C19 i są określane jako słabo metabolizujące (PM). Osoby homozygotyczne (*1/*1) pod względem CYP2C19*1 typu dzikiego lub 1 allelu typu dzikiego i 1 CY¬P2C19*17 mają wydajne enzymy do metabolizowania substratów CYP2C19 i są określane jako osoby intensywnie metabolizujące (EM). Osoby będące heterozygotami (*1/*2, *1/*3) pod względem CYP2C19*1 typu dzikiego są definiowane jako osoby o pośrednim metabolizmie (IM)