Polimorfismo del CYP 2C19 e concentrazione minima di voriconazolo in pazienti adulti cinesi

Ogni isolato di aspergillosi sarà recuperato da campioni clinici (espettorato, fluido di lavaggio broncoalveolare, tessuto bioptico polmonare) e l'identificazione del livello di specie sarà eseguita anche presso l'ospedale di Qilu utilizzando metodi convenzionali (caratteristiche sia macroscopiche che microscopiche). I ceppi di aspergillosi saranno conservati in brodo di glicerolo al 10% a -80 °C. Il test di sensibilità antimicotica in vitro dei ceppi di aspergillosi al voriconazolo sarà eseguito presso il Center for Medical Mycology and Mycoses, First Hospital, Peking University, e le prestazioni saranno conformi alla microdiluizione M38-A2 standard del Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) metodi.

Il test del galattomannano (GM) sierico verrà eseguito due volte a settimana per le prime due settimane. È stato utilizzato un test ELISA GM a doppio sandwich. Un cut-off dell'indice di densità ottica (ODI) >0,5 è stato considerato positivo.

I livelli sierici di voriconazolo saranno misurati il ​​giorno 4, il giorno 7, il giorno 10 e il giorno 14 (tutti i livelli minimi). In breve, l'analisi quantitativa del voriconazolo è stata eseguita utilizzando la cromatografia liquida ad alte prestazioni unita alla spettrometria di massa tandem.

La genotipizzazione del CYP2C19 verrà eseguita utilizzando 3 ml di sangue periferico prelevato in provette con EDTA (acido etilendiamminotetraacetico) al giorno 4. Il DNA genomico è stato estratto dai leucociti del sangue con l'uso di un kit di estrazione del DNA. La genotipizzazione è stata confermata dall'analisi del polimorfismo della lunghezza del frammento di restrizione (RFLP) della reazione a catena della polimerasi (PCR). Gli individui possono essere divisi in tre gruppi secondo il genotipo CYP2C19. Coloro che ereditano due alleli mutanti del CYP2C19 (*2 e/o *3) hanno una ridotta capacità di metabolizzare i substrati del CYP2C19 e sono definiti metabolizzatori lenti (PM). Gli individui omozigoti (*1/*1) per CYP2C19*1 wild-type o 1 allele wild-type e 1 CY¬P2C19*17 hanno enzimi efficienti per metabolizzare i substrati del CYP2C19 e sono definiti come metabolizzatori estensivi (EM). I soggetti che sono eterozigoti (*1/*2, *1/*3) per CYP2C19*1 wild-type sono definiti metabolizzatori intermedi (IM)