Nitrooxidační stres u parodontitidy

Úvod:

Zuby a jejich podpůrné parodontální struktury mají velký význam pro dobré zdraví ústní dutiny. Parodontitida je zánětlivé onemocnění parodontu, které postihuje podpůrné tkáně zubů. Onemocnění je mnohostranné a jeho etiopatogenita není stále plně objasněna, a proto může být léčba různých typů onemocnění parodontu velmi obtížná. Do procesu onemocnění se zapojila řada rizikových faktorů, včetně rizikových determinant a rizikových indikátorů. V poslední době se nashromáždilo silné množství důkazů, které podporují úlohu reaktivního kyslíku (ROS) a dusíkatých látek (RNS) buď jako spouštěcích činidel, nebo častěji jako zhoršovačů primárních lézí u parodontitidy.

Druhy reaktivní s kyslíkem a dusíkem se účastní velkého množství fyziologických a patologických procesů. ROS generované monocyty a neutrofyly během zánětu jsou důležitými faktory agrese v periodontálních tkáních. ROS hrají důležitou roli v aktivaci osteoklastů a v kostní resorpci.

Oxidační stres je stav vznikající, když existuje vážná nerovnováha mezi hladinami volných radikálů v buňce a její antioxidační obranou ve prospěch první z nich. Může tedy dojít k poškození tkáně, když antioxidační systémy nejsou schopny účinně působit proti působení volných radikálů. Když je zánět stimulován bakteriálními patogeny, hostitelské buňky uvolňují prozánětlivé cytokiny (IL-1α, IL-6, IL-8 a tumor necrosis factor-α) jako součást imunitní odpovědi. Tyto cytokiny získávají polymorfonukleární buňky (PMN), které hrají hlavní roli v etiologii periodontálního onemocnění tím, že produkují proteolytické enzymy, jako je elastáza a O2 (molekulární kyslík) oxidativním vzplanutím.

V nedávné studii Abou Sulaiman & Shehadeh zjistili, že celková antioxidační kapacita séra (TAS) byla nižší u syrských nekuřáků s chronickou parodontitidou ve srovnání se zdravými kontrolami. Také uvedli, že periodontální léčba obnovila hladiny TAS na normální hladiny podobné zdravým kontrolám.

Cílem této studie je zhodnotit hladiny ROS a RNS ve vzorcích séra a gingivální crevikulární tekutiny (GCF) odebraných pacientům s paradentózou (chronická a agresivní) a zdravým kontrolám. Následně korelovat tyto hladiny se závažností periodontálního onemocnění u syrských pacientů.

Materiály a metody:

K účasti na této studii bude pozváno celkem 80 subjektů z řad pacientů doporučených na Ústav parodontologie Fakulty zubního lékařství Univerzity v Damašku. Studie byla schválena naší místní revizní komisí. Subjekty budou vybrány podle specifických kritérií pro zařazení po vyplnění lékařských a zubních dotazníků. Pacienti podepíší formulář souhlasu poté, co budou informováni o povaze studie.

Výběr pacientů bude proveden podle kritérií schválených mezinárodním světovým workshopem v roce 1999 pro klasifikační systém onemocnění a stavů parodontu s použitím pěti klinických parametrů a pro diagnostiku plného nebo panoramatického rentgenového snímku.

Předměty budou rozděleny do čtyř skupin:

• Skupina chronické parodontitidy (ChP): zahrnuje 20 pacientů ve věku > 45 let a mají přítomnost ≥2 nesousedících míst na kvadrant, která nebyla prvními moláry nebo řezáky, s hloubkou sondování (PD) ≥5 mm, která při jemném sondování krvácejí. Prokázaná radiografická ztráta kostní hmoty ≥ 30 % délky kořene, pacient se špatnou ústní hygienou, množství nahromaděného plaku úměrné množství klinické úrovně přilnutí (CAL)
• Rezistentní kontrolní skupina (R): zahrnuje 20 pacientů stejného věku a pohlaví, kteří jsou > 45 let a nevykazují žádné známky onemocnění parodontu, což je určeno absencí známek interproximálního (CAL ≤ 1 mm), PD > 3 mm na jakémkoli místě, celá - skóre krvácení z úst <10 % a nemají žádné klinické známky zánětu dásní.
• Skupina Aggressive Parodontitis (AgP): zahrnuje 20 pacientů, kteří jsou ve věku < 35 let a mají diagnostikovanou rychlou ztrátu úponu s hloubkou periodontální kapsy (PD) > 4 mm kolem nejméně tří zubů jiných než prvních molárů a řezáků. Rychlá destrukce kosti (>50% ztráta kosti na nemocných místech). Slabý vztah mezi zubním plakem a závažností zánětu dásní.
• Mladá kontrolní skupina (YC): zahrnuje 20 pacientů stejného věku a pohlaví, kteří jsou < 35 let a nevykazují žádné známky periodontálního onemocnění.

Klinická měření:

Pro záznam periodontálních indexů na šesti místech na zub bude použita standardní parodontální sonda. Mezi vyšetřované klinické parametry patří krvácení při sondování (BOP), index plaku (PI), klinická ztráta přilnutí (CAL) a hloubka periodontální kapsy (PPD) a gingivální index (GI).

Sběr vzorků

Subjekty budou požádány, aby se zdržely čištění kartáčkem do 1 hodiny po odběru vzorků. (GCF) vzorky budou získány pomocí standardních papírových proužků (Periocol strips, Oraflow, NY, USA). 6 vzorků z každého jednotlivého (meziofaciálního, distopalatálního) místa z každého vyšetřovaného zubu (řezák, premolár a molár) v maxile (Capple et al. 2002). Proužky budou vloženy do roztoku PBS pufru na 30 minut, poté extrahovány a skladovány pod kapalným dusíkem.

Vzorky žilní krve budou odebrány z antekubitální jamky a uloženy v lithiových heparinových zkumavkách a ponechány stát 30 minut před centrifugací při 1000 xg po dobu 30 minut, vzorky budou rozděleny do alikvotů do kryogenních lahviček a budou skladovány pod kapalným dusíkem.

Laboratorní studie:

• K hodnocení hladin malondialhydridu jako markeru oxidačního stresu bude použit TBARS test (HPLC).
• Griessovo činidlo pro hodnocení hladin oxidu dusnatého jako markeru nitrosativního stresu.