Stres nitrooksydacyjny w zapaleniu przyzębia

Wprowadzenie:

Zęby i wspierające je struktury przyzębia mają ogromne znaczenie dla dobrego zdrowia jamy ustnej. Zapalenie przyzębia jest chorobą zapalną przyzębia, która atakuje tkanki podtrzymujące zęby. Choroba ma wielopłaszczyznowy charakter, a jej etiopatogenność wciąż nie jest w pełni poznana, dlatego leczenie różnych typów chorób przyzębia może być bardzo trudne. W proces chorobowy zaangażowanych jest wiele czynników ryzyka, w tym determinanty ryzyka i wskaźniki ryzyka. Ostatnio zgromadzono mocne dowody potwierdzające rolę reaktywnego tlenu (ROS) i form azotu (RNS) jako czynników wyzwalających lub częściej pogarszających pierwotne zmiany w zapaleniu przyzębia.

Reaktywne formy tlenu i azotu biorą udział w wielu procesach fizjologicznych i patologicznych. RFT generowane przez monocyty i neutrofile podczas stanu zapalnego są ważnymi czynnikami agresji w tkankach przyzębia. RFT odgrywają ważną rolę w aktywacji osteoklastów i resorpcji kości.

Stres oksydacyjny to stan, który powstaje, gdy dochodzi do poważnego zachwiania równowagi między poziomem wolnych rodników w komórce a jej obroną antyoksydacyjną na korzyść tych pierwszych. Zatem uszkodzenie tkanek może nastąpić, gdy układy antyoksydacyjne nie są w stanie skutecznie przeciwdziałać działaniom wolnych rodników. Zapalenie stymulowane przez patogeny bakteryjne, komórki gospodarza uwalniają cytokiny prozapalne (IL-1α, IL-6, IL-8 i czynnik martwicy nowotworu-α) w ramach odpowiedzi immunologicznej. Te cytokiny rekrutują komórki polimorfojądrowe (PMN), które odgrywają główną rolę w etiologii chorób przyzębia, wytwarzając enzymy proteolityczne, takie jak elastaza i O2 (tlen cząsteczkowy), w wyniku wybuchu oksydacyjnego.

W niedawnym badaniu Abou Sulaiman i Shehadeh odkryli, że całkowita pojemność przeciwutleniająca (TAS) w surowicy była niższa u niepalących syryjskich pacjentów z przewlekłym zapaleniem przyzębia w porównaniu ze zdrowymi osobami z grupy kontrolnej. Zgłosili również, że leczenie przyzębia przywróciło poziomy TAS do normalnych poziomów, podobnie jak u zdrowych osób z grupy kontrolnej.

Celem pracy jest ocena poziomu ROS i RNS w surowicy i próbkach płynu dziąsłowego (GCF) pobranych od pacjentów z zapaleniem przyzębia (przewlekłym i agresywnym) oraz osób zdrowych. Następnie skorelowano te poziomy z ciężkością choroby przyzębia u pacjentów syryjskich.

Materiały i metody:

W sumie 80 osób zostanie zaproszonych do udziału w tym badaniu spośród pacjentów skierowanych do Kliniki Periodontologii Wydziału Stomatologii Uniwersytetu w Damaszku. Badanie zostało zatwierdzone przez naszą lokalną Komisję Rewizyjną. Osoby badane będą rekrutowane zgodnie z określonymi kryteriami włączenia po wypełnieniu kwestionariuszy historii medycznej i dentystycznej. Pacjenci podpisują formularz zgody po poinformowaniu ich o charakterze badania.

Wybór pacjentów zostanie dokonany zgodnie z kryteriami zatwierdzonymi przez międzynarodowe światowe warsztaty w 1999 r. dotyczące systemu klasyfikacji chorób i schorzeń przyzębia z wykorzystaniem pięciu parametrów klinicznych oraz pełnych lub panoramicznych zdjęć rentgenowskich do diagnozy.

Przedmioty zostaną podzielone na cztery grupy:

• Grupa przewlekłego zapalenia przyzębia (ChP): obejmuje 20 pacjentów w wieku > 45 lat, u których występują ≥ 2 niesąsiadujące miejsca na kwadrant, które nie były pierwszymi zębami trzonowymi lub siekaczami, z głębokością zgłębnika (PD) ≥ 5 mm, które krwawią przy delikatnym sondowaniu. Stwierdzony radiograficznie ubytek kości ≥30% długości korzenia, pacjent ze złą higieną jamy ustnej, ilość nagromadzonej płytki nazębnej proporcjonalna do wielkości przyczepu klinicznego (CAL)
• Oporna grupa kontrolna (R): składa się z 20 pacjentów dobranych pod względem wieku i płci, którzy mają > 45 lat i nie wykazują objawów choroby przyzębia, co określono na podstawie braku dowodów na interproksymalne (CAL ≤ 1 mm), PD > 3 mm w jakimkolwiek miejscu, całe - krwawienia z jamy ustnej <10% i brak klinicznych objawów zapalenia dziąseł.
• Grupa agresywnego zapalenia przyzębia (AgP): obejmuje 20 pacjentów w wieku < 35 lat, u których zdiagnozowano szybką utratę przyczepu z głębokością kieszonek przyzębnych (PD) > 4 mm wokół co najmniej trzech zębów innych niż pierwsze zęby trzonowe i siekacze. Szybka destrukcja kości (> 50% utrata kości w chorych miejscach). Słaby związek między płytką nazębną a nasileniem zapalenia dziąseł.
• Młoda grupa kontrolna (YC): obejmuje 20 pacjentów dobranych pod względem wieku i płci, którzy są < 35 lat i nie wykazują objawów choroby przyzębia.

Pomiary kliniczne:

Do rejestracji wskaźników periodontologicznych w sześciu miejscach na ząb zostanie użyta standardowa sonda periodontologiczna. Badane parametry kliniczne obejmują krwawienie przy sondowaniu (BOP), wskaźnik płytki nazębnej (PI), kliniczną utratę przyczepu (CAL) oraz głębokość kieszonek dziąsłowych (PPD) i wskaźnik dziąsłowy (GI).

Zbiór próbek

Osoby badane zostaną poproszone o powstrzymanie się od szczotkowania w ciągu 1 godziny od pobrania próbki. Próbki (GCF) zostaną uzyskane przy użyciu standardowych pasków papieru (Periocol strips, Oraflow, NY, USA). 6 próbek z każdego pojedynczego miejsca (mesio-twarzowego, dystopalnego) z każdego badanego zęba (siekacza, przedtrzonowego i trzonowego) w szczęce (Chapple et al. 2002). Paski zostaną umieszczone w roztworze buforu PBS na 30 minut, następnie ekstrahowane i przechowywane w ciekłym azocie.

Próbki krwi żylnej zostaną pobrane z dołu łokciowego i będą przechowywane w probówkach z heparyną litową i pozostawione na 30 minut przed odwirowaniem przy 1000 xg przez 30 minut, próbki zostaną podzielone na porcje do fiolek kriogenicznych i będą przechowywane w ciekłym azocie.

Badania laboratoryjne:

• Test TBARS (HPLC) zostanie wykorzystany do oceny poziomu dwuwodoromalonu jako markera stresu oksydacyjnego.
• Odczynnik Griessa do oceny poziomu tlenku azotu jako markera stresu nitrozacyjnego.