Estresse Nitro-oxidativo na Periodontite

Introdução:

Os dentes e suas estruturas periodontais de suporte são de grande importância para uma boa saúde bucal. A periodontite é uma doença inflamatória do periodonto que afeta os tecidos de suporte dos dentes. A doença é multifacetada e sua etiopatogenia ainda não é totalmente compreendida e, portanto, o tratamento de diferentes tipos de doença periodontal pode ser muito difícil. Numerosos fatores de risco têm sido implicados no processo da doença, incluindo determinantes e indicadores de risco. Mais recentemente, um forte corpo de evidências se acumulou para apoiar o papel das espécies reativas de oxigênio (ROS) e nitrogênio (RNS) como agentes desencadeantes ou, mais frequentemente, agravantes das lesões primárias na periodontite.

Espécies reativas de oxigênio e nitrogênio estão envolvidas em um grande número de processos fisiológicos e patológicos. As ROS geradas por monócitos e neutrófilos durante a inflamação são importantes fatores de agressão nos tecidos periodontais. As ROS desempenham um papel importante na ativação dos osteoclastos e na reabsorção óssea.

O estresse oxidativo é uma condição que surge quando há um sério desequilíbrio entre os níveis de radicais livres em uma célula e suas defesas antioxidantes em favor dos primeiros. Assim, o dano tecidual pode ocorrer quando os sistemas antioxidantes são incapazes de neutralizar as ações dos radicais livres de forma eficiente. A inflamação quando estimulada por patógenos bacterianos, as células hospedeiras liberam citocinas pró-inflamatórias (IL-1α, IL-6, IL-8 e fator de necrose tumoral-α) como parte da resposta imune. Essas citocinas recrutam células polimorfonucleares (PMNs) que desempenham um papel importante na etiologia da doença periodontal por produzirem enzimas proteolíticas, como elastase e O2 (oxigênio molecular) pela explosão oxidativa.

Em um estudo recente, Abou Sulaiman & Shehadeh descobriram que a capacidade antioxidante total sérica (TAS) era menor em pacientes sírios não fumantes com periodontite crônica em comparação com controles saudáveis. Além disso, eles relataram que o tratamento periodontal restaurou os níveis de TAS para níveis normais, semelhantes aos controles saudáveis.

O objetivo deste estudo é avaliar os níveis de ROS e RNS em amostras de soro e fluido crevicular gengival (GCF) retiradas de pacientes com periodontite (crônica e agressiva) e controles saudáveis. Posteriormente, correlacionar esses níveis com a gravidade da doença periodontal em pacientes sírios.

Materiais e métodos:

Um total de 80 indivíduos serão convidados a participar deste estudo dos pacientes encaminhados ao Departamento de Periodontologia da Faculdade de Odontologia da Universidade de Damasco. O estudo foi aprovado pelo nosso Conselho de Revisão local. Os indivíduos serão recrutados de acordo com critérios de inclusão específicos após a conclusão de questionários de histórico médico e odontológico. Os pacientes assinarão um termo de consentimento após serem informados sobre a natureza do estudo.

A seleção dos pacientes será feita de acordo com os critérios aprovados pelo workshop mundial internacional de 1999 para um sistema de classificação de doenças e condições periodontais usando cinco parâmetros clínicos e radiografias panorâmicas ou de boca inteira para diagnóstico.

Os sujeitos serão alocados em quatro grupos:

• Grupo Periodontite Crônica (ChP): compreende 20 pacientes com idade > 45 anos e presença de ≥2 sítios não adjacentes por quadrante que não sejam primeiros molares ou incisivos, com profundidade de sondagem (PD) ≥5 mm, que sangram à sondagem suave. A perda óssea radiográfica demonstrada ≥30% do comprimento da raiz, paciente com má higiene oral, a quantidade de placa acumulada compatível com a quantidade de nível de inserção clínica (CAL)
• Grupo Controle Resistente (R): compreende 20 pacientes pareados por sexo e idade > 45 anos que não apresentam sinais de doença periodontal conforme determinado pela ausência de evidência de interproximal (CAL ≤ 1mm), PD > 3 mm em qualquer local, inteiro -escores de sangramento bucal <10% e sem sinais clínicos de inflamação gengival.
• Grupo Periodontite Agressiva (AgP): compreende 20 pacientes com idade < 35 anos e diagnosticados com perda rápida de inserção com profundidade de bolsa periodontal (PD) > 4 mm ao redor de pelo menos três dentes além dos primeiros molares e incisivos. Destruição óssea rápida (> 50% de perda óssea nos locais afetados). Fraca relação entre a placa dental e a gravidade da inflamação gengival.
• Grupo Controle Jovem (JC): compreende 20 pacientes pareados por idade e sexo, < 35 anos e sem sinais de doença periodontal.

Medições clínicas:

Uma sonda periodontal padrão será usada para registrar os índices periodontais em seis locais por dente. Os parâmetros clínicos examinados incluem sangramento à sondagem (BOP), índice de placa (PI), perda de inserção clínica (CAL) e profundidade da bolsa periodontal (PPD) e índice gengival (GI).

Coleta de amostras

Os indivíduos serão solicitados a abster-se de escovar dentro de 1 hora após a amostragem. (GCF) amostras serão obtidas usando tiras de papel padrão (tiras Periocol, Oraflow, NY, EUA). 6 amostras de cada local individual (mesiofacial, distopalatal) de cada dente examinado (incisivo, pré-molar e molar) na maxila (Chapple et al. 2002). As tiras serão colocadas em solução tampão PBS por 30 minutos, depois extraídas e armazenadas em nitrogênio líquido.

Amostras de sangue venoso serão coletadas da fossa antecubital e armazenadas em tubos de heparina de lítio e deixadas em repouso por 30 minutos antes de serem centrifugadas a 1000 × g por 30 minutos, as amostras serão aliquotadas em frascos criogênicos e armazenadas sob nitrogênio líquido.

Estudos laboratoriais:

• O ensaio TBARS (HPLC) será utilizado para avaliar os níveis de malondialdiído como marcador de estresse oxidativo.
• Reagente de Griess para avaliar os níveis de óxido nítrico como marcador de estresse nitrosativo.