Stress nitro-ossidativo nella parodontite

Introduzione:

I denti e le loro strutture parodontali di supporto sono di grande importanza per una buona salute orale. La parodontite è una malattia infiammatoria del parodonto che colpisce i tessuti di sostegno dei denti. La malattia è multiforme e la sua eziopatogenesi non è ancora del tutto compresa e pertanto il trattamento di diversi tipi di malattia parodontale può essere molto difficile. Numerosi fattori di rischio sono stati implicati nel processo della malattia, compresi i fattori determinanti e gli indicatori di rischio. Più di recente, si è accumulato un forte numero di prove a sostegno del ruolo delle specie reattive dell'ossigeno (ROS) e dell'azoto (RNS) come agenti scatenanti o, più frequentemente, aggravanti delle lesioni primarie nella parodontite.

Le specie reattive all'ossigeno e all'azoto sono coinvolte in un gran numero di processi fisiologici e patologici. I ROS generati da monociti e neutrofili durante l'infiammazione sono importanti fattori di aggressione nei tessuti parodontali. I ROS svolgono un ruolo importante nell'attivazione degli osteoclasti e nel riassorbimento osseo.

Lo stress ossidativo è una condizione che insorge quando si verifica un grave squilibrio tra i livelli di radicali liberi in una cellula e le sue difese antiossidanti a favore dei primi. Pertanto, il danno tissutale può verificarsi quando i sistemi antiossidanti non sono in grado di contrastare efficacemente le azioni dei radicali liberi. Infiammazione quando stimolata da agenti patogeni batterici, le cellule ospiti rilasciano citochine proinfiammatorie (IL-1α, IL-6, IL-8 e fattore di necrosi tumorale-α) come parte della risposta immunitaria. Queste citochine reclutano cellule polimorfonucleate (PMN) che svolgono un ruolo importante nell'eziologia della malattia parodontale producendo enzimi proteolitici, come elastasi e O2 (ossigeno molecolare) mediante il burst ossidativo.

In uno studio recente, Abou Sulaiman e Shehadeh hanno scoperto che la capacità antiossidante totale (TAS) sierica era inferiore nei pazienti siriani non fumatori con parodontite cronica rispetto ai controlli sani. Inoltre, hanno riferito che il trattamento parodontale ha ripristinato i livelli di TAS a livelli normali simili ai controlli sani.

Lo scopo di questo studio è valutare i livelli di ROS e RNS in campioni di siero e di fluido crevicolare gengivale (GCF) prelevati da pazienti con parodontite (cronica e aggressiva) e controlli sani. Successivamente, correlando questi livelli con la gravità della malattia parodontale nei pazienti siriani.

Materiali e metodi:

Un totale di 80 soggetti saranno invitati a partecipare a questo studio dai pazienti riferiti al Dipartimento di Parodontologia, Facoltà di Odontoiatria, Università di Damasco. Lo studio è stato approvato dal nostro Review Board locale. I soggetti verranno reclutati in base a criteri di inclusione specifici dopo il completamento dei questionari di anamnesi medica e dentale. I pazienti firmeranno un modulo di consenso dopo essere stati informati sulla natura dello studio.

La selezione dei pazienti sarà effettuata secondo i criteri approvati dal workshop mondiale internazionale del 1999 per un sistema di classificazione delle malattie e delle condizioni parodontali utilizzando cinque parametri clinici e radiografie della bocca piena o panoramiche per la diagnosi.

I soggetti saranno assegnati in quattro gruppi:

• Gruppo parodontite cronica (ChP): comprende 20 pazienti di età > 45 anni e con presenza di ≥2 siti non adiacenti per quadrante che non erano primi molari o incisivi, con profondità di sondaggio (PD) ≥5 mm, che sanguinano al sondaggio delicato. La perdita ossea radiografica dimostrata ≥30% della lunghezza della radice, paziente con scarsa igiene orale, la quantità di placca accumulata commisurata alla quantità di livello di attacco clinico (CAL)
• Gruppo di controllo resistente (R): comprende 20 pazienti abbinati per età e sesso di età > 45 anni che non presentano segni di malattia parodontale come determinato dall'assenza di evidenza di interprossimale (CAL ≤ 1 mm), PD > 3 mm in qualsiasi sito, intero punteggi di sanguinamento della bocca <10% e non hanno segni clinici di infiammazione gengivale.
• Gruppo di parodontite aggressiva (AgP): comprende 20 pazienti di età < 35 anni e con diagnosi di rapida perdita di attacco con profondità della tasca parodontale (PD) > 4 mm attorno ad almeno tre denti diversi dai primi molari e incisivi. Rapida distruzione ossea (>50% di perdita ossea nei siti malati). Relazione debole tra la placca dentale e la gravità dell'infiammazione gengivale.
• Gruppo di controllo giovane (YC): comprende 20 pazienti abbinati per età e sesso che hanno meno di 35 anni e non presentano segni di malattia parodontale.

Misure cliniche:

Verrà utilizzata una sonda parodontale standard per registrare gli indici parodontali in sei siti per dente. I parametri clinici esaminati includono sanguinamento al sondaggio (BOP), indice di placca (PI), perdita di attacco clinico (CAL) e profondità della tasca parodontale (PPD) e indice gengivale (GI).

Raccolta di campioni

Ai soggetti verrà chiesto di astenersi dallo spazzolare entro 1 ora dal campionamento. (GCF) i campioni saranno ottenuti utilizzando strisce di carta standard (strisce Periocol, Oraflow, NY, USA). 6 campioni da ciascun singolo sito (mesiofacciale, distopalatale) da ciascun dente esaminato (incisivo, premolare e molare) nella mascella (Chapple et al. 2002). Le strisce verranno poste nella soluzione tampone PBS per 30 minuti, quindi estratte e conservate sotto azoto liquido.

I campioni di sangue venoso saranno raccolti dalla fossa antecubitale e conservati in tubi di eparina di litio e lasciati riposare per 30 minuti prima di essere centrifugati a 1000 × g per 30 minuti, i campioni saranno aliquotati in fiale criogeniche e saranno conservati sotto azoto liquido.

Studi di laboratorio:

• Il saggio TBARS (HPLC) sarà utilizzato per valutare i livelli di malondialdiide come marcatore di stress ossidativo.
• Reagente di Griess per valutare i livelli di ossido nitrico come marker di stress nitrosativo.