Нитро-окислительный стресс при пародонтите

Вступление:

Зубы и поддерживающие их пародонтальные структуры имеют большое значение для хорошего здоровья полости рта. Пародонтит – это воспалительное заболевание пародонта, поражающее опорные ткани зубов. Заболевание многогранно и его этиопатогенез до сих пор до конца не изучен, в связи с чем лечение различных видов пародонтоза может быть весьма затруднено. В процесс заболевания вовлечены многочисленные факторы риска, включая детерминанты риска и индикаторы риска. В последнее время накопились убедительные данные, подтверждающие роль активных форм кислорода (АФК) и форм азота (АФК) либо в качестве триггерных агентов, либо, что чаще, в качестве факторов, усугубляющих первичные поражения при пародонтите.

Реактивные формы кислорода и азота участвуют в большом количестве физиологических и патологических процессов. АФК, продуцируемые моноцитами и нейтрофилами при воспалении, являются важными факторами агрессии в тканях пародонта. АФК играют важную роль в активации остеокластов и резорбции кости.

Окислительный стресс — это состояние, возникающее при наличии серьезного дисбаланса между уровнями свободных радикалов в клетке и ее антиоксидантной защитой в пользу первых. Таким образом, повреждение тканей может произойти, когда антиоксидантные системы не могут эффективно противодействовать действию свободных радикалов. Воспаление при стимуляции бактериальными патогенами клетки-хозяева выделяют провоспалительные цитокины (ИЛ-1α, ИЛ-6, ИЛ-8 и фактор некроза опухоли-α) как часть иммунного ответа. Эти цитокины привлекают полиморфноядерные клетки (PMN), которые играют важную роль в этиологии заболеваний пародонта, путем выработки протеолитических ферментов, таких как эластаза и O2 (молекулярный кислород), посредством окислительного взрыва.

В недавнем исследовании Abou Sulaiman & Shehadeh обнаружили, что общая антиоксидантная способность сыворотки (ОАС) была ниже у некурящих сирийских пациентов с хроническим пародонтитом по сравнению со здоровыми людьми из контрольной группы. Кроме того, они сообщили, что лечение пародонта восстанавливало уровни ТАС до нормальных уровней, аналогичных здоровым контрольным группам.

Целью данного исследования является оценка уровней ROS и RNS в образцах сыворотки и жидкости десневой борозды (GCF), взятых у пациентов с пародонтитом (хроническим и агрессивным) и у здоровых людей. Впоследствии, коррелируя эти уровни с тяжестью заболевания пародонта у сирийских пациентов.

Материалы и методы:

Всего для участия в этом исследовании будет приглашено 80 пациентов из числа пациентов, направленных на кафедру пародонтологии стоматологического факультета Дамасского университета. Исследование было одобрено нашим местным наблюдательным советом. Субъекты будут набраны в соответствии с конкретными критериями включения после заполнения анкет по истории болезни и стоматологии. Пациенты подписывают форму согласия после того, как им сообщат о характере исследования.

Отбор пациентов будет производиться в соответствии с критериями, одобренными международным всемирным семинаром 1999 г. для системы классификации заболеваний и состояний пародонта с использованием пяти клинических параметров и полноротовых или панорамных рентгенограмм для диагностики.

Субъекты будут разделены на четыре группы:

• Группа хронического пародонтита (ХП): включает 20 пациентов в возрасте > 45 лет с наличием ≥2 несмежных участков в квадранте, которые не были первыми молярами или резцами, с глубиной зондирования (PD) ≥5 мм, которые кровоточат при осторожном зондировании. Продемонстрированная рентгенологически потеря костной ткани ≥30% длины корня, пациент с плохой гигиеной полости рта, количество скопившегося зубного налета, соизмеримое с уровнем клинического прикрепления (CAL)
• Устойчивая контрольная группа (R): включает 20 пациентов того же пола, возраст которых > 45 лет, у которых нет признаков пародонтоза, что определяется отсутствием признаков интерпроксимального (CAL ≤ 1 мм), PD > 3 мм в любом месте, всего - ротовая кровоточивость оценивается <10% и не имеет клинических признаков воспаления десен.
• Группа с агрессивным пародонтитом (AgP): включает 20 пациентов в возрасте < 35 лет, у которых диагностирована быстрая потеря прикрепления с глубиной пародонтального кармана (PD) > 4 мм вокруг как минимум трех зубов, кроме первых моляров и резцов. Быстрое разрушение кости (> 50% потери кости в пораженных участках). Слабая связь между зубным налетом и тяжестью воспаления десен.
• Группа Young Control (YC): включает 20 пациентов, сопоставимых по возрасту и полу, в возрасте < 35 лет и без признаков заболевания пародонта.

Клинические измерения:

Стандартный пародонтальный зонд будет использоваться для записи пародонтальных индексов в шести местах на зуб. Изучаемые клинические параметры включают кровоточивость при зондировании (BOP), индекс налета (PI), потерю клинического прикрепления (CAL), глубину пародонтального кармана (PPD) и индекс десны (GI).

Сбор образцов

Субъектов попросят воздержаться от чистки зубов в течение 1 часа после взятия проб. Образцы (GCF) будут получены с использованием стандартных бумажных полосок (полоски Periocol, Oraflow, Нью-Йорк, США). 6 образцов из каждой отдельной (мезиофациальной, дистопалатальной) области каждого исследованного зуба (резца, премоляра и моляра) верхней челюсти (Chapple et al. 2002). Полоски помещают в буферный раствор PBS на 30 минут, затем экстрагируют и хранят в атмосфере жидкого азота.

Образцы венозной крови будут собираться из локтевой ямки и храниться в пробирках с литий-гепарином и оставлены на 30 минут, а затем центрифугированы при 1000 × g в течение 30 минут, образцы будут разделены на аликвоты в криогенные флаконы и будут храниться в атмосфере жидкого азота.

Лабораторные исследования:

• Анализ TBARS (ВЭЖХ) будет использоваться для оценки уровней малондиальдегида как маркера окислительного стресса.
• Реактив Грисса для оценки уровня оксида азота как маркера нитрозативного стресса.