Estrés nitro-oxidativo en periodontitis

Introducción:

Los dientes y sus estructuras periodontales de soporte son de gran importancia para una buena salud oral. La periodontitis es una enfermedad inflamatoria del periodonto que afecta a los tejidos de soporte de los dientes. La enfermedad es multifacética y su etiopatogenia aún no se comprende por completo y, por lo tanto, el tratamiento de los diferentes tipos de enfermedad periodontal puede ser muy difícil. Se han implicado numerosos factores de riesgo en el proceso de la enfermedad, incluidos los determinantes de riesgo y los indicadores de riesgo. Más recientemente, se ha acumulado un fuerte cuerpo de evidencia para apoyar el papel de las especies reactivas de oxígeno (ROS) y nitrógeno (RNS), ya sea como agentes desencadenantes o, más frecuentemente, como agravantes de las lesiones primarias en la periodontitis.

Las especies reactivas de oxígeno y nitrógeno están involucradas en un gran número de procesos fisiológicos y patológicos. Las ROS generadas por monocitos y neutrófilos durante la inflamación son importantes factores de agresión en los tejidos periodontales. Las ROS juegan un papel importante en la activación de los osteoclastos y en la resorción ósea.

El estrés oxidativo es una condición que surge cuando existe un desequilibrio importante entre los niveles de radicales libres en una célula y sus defensas antioxidantes a favor de los primeros. Por lo tanto, el daño tisular puede resultar cuando los sistemas antioxidantes no pueden contrarrestar las acciones de los radicales libres de manera eficiente. Cuando la inflamación es estimulada por patógenos bacterianos, las células huésped liberan citoquinas proinflamatorias (IL-1α, IL-6, IL-8 y factor de necrosis tumoral-α) como parte de la respuesta inmunitaria. Estas citocinas reclutan células polimorfonucleares (PMN) que desempeñan un papel importante en la etiología de la enfermedad periodontal al producir enzimas proteolíticas, como elastasa y O2 (oxígeno molecular) por el estallido oxidativo.

En un estudio reciente, Abou Sulaiman & Shehadeh encontraron que la capacidad antioxidante total (TAS) sérica era menor en pacientes sirios no fumadores con periodontitis crónica en comparación con controles sanos. Además, informaron que el tratamiento periodontal restauró los niveles de TAS a niveles normales similares a los controles sanos.

El objetivo de este estudio es evaluar los niveles de ROS y RNS en muestras de suero y líquido crevicular gingival (GCF) tomadas de pacientes con periodontitis (crónica y agresiva) y controles sanos. Posteriormente, correlacionando estos niveles con la severidad de la enfermedad periodontal en pacientes sirios.

Materiales y métodos:

Se invitará a un total de 80 sujetos a participar en este estudio de los pacientes remitidos al Departamento de Periodoncia, Facultad de Odontología, Universidad de Damasco. El estudio ha sido aprobado por nuestra Junta de Revisión local. Los sujetos serán reclutados de acuerdo con criterios de inclusión específicos después de completar los cuestionarios de historial médico y dental. Los pacientes firmarán un formulario de consentimiento después de ser informados sobre la naturaleza del estudio.

La selección de pacientes se hará de acuerdo a los criterios aprobados por el taller mundial internacional de 1999 para un sistema de clasificación de enfermedades y condiciones periodontales usando cinco parámetros clínicos y radiografías de boca completa o panorámicas para el diagnóstico.

Los sujetos se distribuirán en cuatro grupos:

• Grupo Periodontitis Crónica (ChP): compuesto por 20 pacientes mayores de 45 años y con presencia de ≥2 sitios no adyacentes por cuadrante que no fueran primeros molares o incisivos, con profundidad de sondaje (PD) ≥5 mm, que sangran al sondaje suave. La pérdida ósea radiográfica demostrada ≥30% de la longitud de la raíz, paciente con mala higiene bucal, la cantidad de placa acumulada acorde con la cantidad de nivel de inserción clínica (CAL)
• Grupo de control resistente (R): compuesto por 20 pacientes emparejados por edad y sexo que tienen > 45 años y no muestran signos de enfermedad periodontal según lo determinado por la ausencia de evidencia de interproximal (CAL ≤ 1 mm), PD > 3 mm en cualquier sitio, completo -puntuaciones de sangrado bucal <10% y no tienen signos clínicos de inflamación gingival.
• Grupo de Periodontitis Agresiva (AgP): compuesto por 20 pacientes menores de 35 años y diagnosticados con pérdida de inserción rápida con profundidad de bolsa periodontal (DP) > 4 mm alrededor de al menos tres dientes distintos de los primeros molares e incisivos. Destrucción ósea rápida (>50% de pérdida ósea en los sitios afectados). Relación débil entre la placa dental y la severidad de la inflamación gingival.
• Grupo de control joven (YC): compuesto por 20 pacientes de la misma edad y sexo que tienen < 35 años y no muestran signos de enfermedad periodontal.

Mediciones clínicas:

Se utilizará una sonda periodontal estándar para registrar los índices periodontales en seis sitios por diente. Los parámetros clínicos examinados incluyen sangrado al sondaje (BOP), índice de placa (PI), pérdida de inserción clínica (CAL) y profundidad de la bolsa periodontal (PPD) e índice gingival (GI).

Recogida de muestras

Se les pedirá a los sujetos que se abstengan de cepillarse los dientes dentro de 1 hora de la toma de muestras. (GCF) las muestras se obtendrán utilizando tiras de papel estándar (tiras de Periocol, Oraflow, NY, EE. UU.). 6 muestras de cada sitio individual (mesiofacial, distopalatal) de cada diente examinado (incisivo, premolar y molar) en el maxilar superior (Chapple et al. 2002). Las tiras se colocarán en solución tampón PBS durante 30 minutos, luego se extraerán y almacenarán bajo nitrógeno líquido.

Las muestras de sangre venosa se recolectarán de la fosa antecubital y se almacenarán en tubos de heparina de litio y se dejarán reposar durante 30 minutos antes de centrifugarlas a 1000 ×g durante 30 minutos, las muestras se dividirán en alícuotas en viales criogénicos y se almacenarán en nitrógeno líquido.

Estudios de laboratorio:

• Se utilizará el ensayo TBARS (HPLC) para evaluar los niveles de malondialdihído como marcador de estrés oxidativo.
• Reactivo de Griess para evaluar los niveles de óxido nítrico como marcador de estrés nitrosativo.