Vrozený imunitní systém střev u novorozenců. Vývoj a zánět ve zdraví a nemoci (INTINE)

1. Studie NEC 1.1. Kritéria pro zařazení Předčasně narozené děti < 32. týden GA. Celkový počet, který bude zahrnut, bude 200 1.2. Kritéria vyloučení Předčasně narození s vrozenými chorobami nebo jinými vážnými stavy mohou účast odložit.

Situace, kdy je odběr tkáně při operaci nemožný nebo problematický, např. vzhledem ke zbývající délce vitálního střeva jsou dle uvážení operujícího chirurga hodnoceny jako příliš krátké.

1.3. Návrh studie Kojenci budou zařazeni hned po narození po získání souhlasu na základě písemných a ústních informací. Vzorky stolice budou odebírány od 1. dne života a každý týden po dobu následujících týdnů až do propuštění, aby se prozkoumalo složení fekálního mikrobiomu ve vztahu k rozvoji NEC a účinku léčebné terapie.

V případě rozvoje NEC s nutností operace dojde k resekci postiženého střeva, založení stomií. Vzorky fekálního obsahu a tkáně se odebírají ze střeva proximálně a distálně od rozděleného střeva. V době reverze stomií bude tkáň odebrána jak proximální, tak distální od dělení, aby se prozkoumal vývoj střeva během raného věku a také potenciální nutriční účinky na zralost střeva. Kojenci, kteří nepodstoupí operaci, slouží jako kontroly, ti, kteří jsou léčeni pro NEC pouze antibiotiky, budou zahrnuti do dílčí analýzy porovnávající mikrobiom kojenců, kteří potřebují operaci.

1.4. Odběr vzorků 1.4.1. Vzorky stolice Vzorky stolice se odebírají co nejdříve po porodu a jednou týdně až do propuštění. Výkaly jsou seškrabávány z plenky, jakmile se objeví. Částka musí odpovídat nehtu. V každém časovém bodě se odebírají dva vzorky. Obličeje budou uloženy ve vhodné zkumavce, po odběru se obsah smíchá s pufrem (fyziologickým roztokem) 1:2 před zmrazením na -600 stupňů C. Fekální obsah odebraný při primární operaci a při obratu stomie, vzorky se připraví obdobně.

1.4.2. Vzorky střeva Při chirurgickém zákroku se odebere vzorek tkáně z proximálního a distálního konce resekovaného střeva a zbytkového střeva a ihned po odběru rychle zmrazí a uloží při teplotě -800 C. Abychom mohli odebrat co nejvíce vzorků tkáně, naše strategie bude rychlé zmrazení alespoň 4 vzorků (přibližně 1 cm2) resekované tkáně; 2 ze zdravého místa a 2 z nemocného místa střeva. Jeden nebo více vzorků bude připraveno pro čerstvou analýzu na DTU (pouze od kojenců z Rigshospitalet). Při obrácení stomie bude odebrána tkáň z místa stomie a proximálního konce odkloněného střeva. Veškerá tkáň bude přenesena do biobanky, kterou provozuje OPEN v Odense University Hospital.

1.5. Výsledky 1.5.1. Primární Zkoumat roli mikrobioty ve vývoji NEC a souvisejících změn ve střevním imunitním systému u těch, kteří budou operováni 1.5.2. Sekundární: Demografické údaje, jako je GA, BW, typ porodu a Apgar skóre Klinické: Růst, typ výživy, počet dní na TPN, počet dní s centrálním žilním katétrem a lékařskou léčbou. 1.6. Informace a souhlas Předčasně narozené děti přijaté buď na oddělení intenzivní péče o kojence a batolata, Rigshospitalet nebo na oddělení neonatologie OUH, budou podrobeny screeningu způsobilosti. Potřebné informace budou předány řešitelům. U dětí, které splňují kritéria pro zařazení, budou rodiče osloveni a informováni o projektu a požádáni o účast ve studii a jejich informovaný písemný souhlas. Souhlas rodičů s účastí ve studii musí být doložen v elektronickém zdravotním záznamu pacienta. Před odběrem jakýchkoli vzorků pro projekt je nutné získat informovaný souhlas. Pokud si to rodiče přejí, mohou mít přístup k přihlížejícímu z řad personálu, který nemá přímý vztah k výzkumnému projektu, a budou mít také možnost vzít si s sebou hodnotitele. Kromě písemných a ústních informací o studii bude do závěti rodičů doručena brožura „Før du beslutter dig: Om at være forsøgsperson i sundhedsvidenskabelige forsøg“ od VEK, spolu s brožurou „Forsøgspersonens rettigheder i et sundhedsvidenskabeligt forskningsprojekt“. Pokud rodiče souhlasí, obdrží kopii formuláře informovaného souhlasu.

Je-li to možné, bude před podepsáním informovaného souhlasu nabídnuta lhůta na zvážení 24 hodin, v takovém případě bude naplánováno nové setkání (screening). Pokud účastníci nepožadují čas na zvážení, může prohlášení o informovaném souhlasu podepsat bezprostředně po informační schůzce matka účastníka nebo rodiče účastníka a zkoušejícího (nebo výzkumného týmu, kterému byla tato odpovědnost přidělena zkoušejícím) . Po podpisu informovaného souhlasu bude účastníkovi nabídnuta jeho kopie. Podepsaný informovaný souhlas je nezbytným předpokladem pro zahájení screeningu nebo jakýchkoli postupů souvisejících se studií.

1. Studie Atresia 1.1. Zařazení Všichni novorozenci a děti do 1 roku věku musí podstoupit střevní operaci z důvodu atrézie v kterémkoli místě střeva. Předpokládá se zařazení celkem 75 pacientů.

1.2. Vyloučení U kojenců a dětí by odběr vzorků střevní tkáně ohrozil chirurgický zákrok a zdraví pacienta.

1.3. Návrh studie Kojenci s vrozenými malformacemi budou muset podstoupit plánovanou operaci k resekci a/nebo anastomóze postižené oblasti střeva a někteří dostanou stomii, kterou je třeba později zrušit. Při primární operaci budou vzorky stolice a střevní tkáně odebrány proximálně a distálně od patologie. V případech se stomií a v případě, že dítě podstoupí pozdější reverzní operaci, se odeberou vzorky tkáně z proximálního a distálního konce střeva spolu se vzorky stolice.

1.4. Odběr vzorků 1.4.1. Vzorky stolice Vzorky stolice se odebírají co nejdříve po primární operaci a jednou týdně až do propuštění. Výkaly se z plenky seškrábou, jakmile se objeví. Částka musí odpovídat nehtu. V každém časovém bodě se odebírají dva vzorky. Trus bude uchováván ve vhodné zkumavce, po odběru se obsah smíchá s pufrem (fyziologickým roztokem) 1:2 před zmrazením na -600°C. Fekální obsah odebraný při primární operaci a při obratu stomie, vzorky se připraví obdobně.

1.4.2. Střevní vzorky Při operaci budou odebrány 2 nebo více vzorků tkáně z proximálního a distálního střeva. Abychom mohli odebrat co nejvíce vzorků tkáně, bude naší strategií rychle zmrazit alespoň 4 vzorky (přibližně 1 cm2) resekované tkáně; 2 z proximální a distální části. Jeden nebo více vzorků bude připraveno pro čerstvou analýzu na DTU (pouze od kojenců na Rigshospitalet). Stejný postup bude proveden při obrácení stomie. Veškerá tkáň bude po ukončení studie převedena do biobanky provozované OPEN v Odense University Hospital.

1.5. Výsledky: 1.5.1. Primární stavba a vývoj střevního imunitního systému a kolonizace střevních bakterií v čase 1.5.2. Sekundární demografické údaje jako GA, BW, typ porodu a Apgar skóre Klinické: Růst, typ výživy, lékařské ošetření a průběh onemocnění. 1.6. Informace a souhlas Kojenci narození s vrozenou malformací v gastrointestinálním traktu, která vyžaduje operaci, budou podrobeni screeningu pro způsobilost. Potřebné informace budou předány řešitelům. U dětí, které splňují kritéria pro zařazení, budou rodiče osloveni a informováni o projektu a požádáni o účast ve studii a jejich informovaný písemný souhlas. Souhlas rodičů s účastí ve studii musí být doložen v elektronickém zdravotním záznamu pacienta. Před odběrem jakýchkoliv vzorků pro projekt je nutné získat informovaný souhlas. Písemnou a ústní informaci provedou pracovníci buď Kliniky intenzivní péče o kojence a batolata, Rigshospitalet, Klinika dětské chirurgie, Rigshospitalet, Klinika dětské chirurgie, OUH nebo Neonatologická klinika OUH. Pokud si rodina přeje, může mít přístup k přihlížejícímu z řad personálu, který nemá přímý vztah k výzkumnému projektu, a bude mít také možnost vzít si s sebou hodnotitele. Kromě písemných a ústních informací o studii byla do závěti rodičů doručena brožura „Før du beslutter dig: Om at være forsøgsperson i sundhedsvidenskabelige forsøg“ od VEK spolu s brožurou „Forsøgspersonens rettigheder i et sundhedsvidenskabeligt forskningsprojekt“. Pokud rodiče souhlasí, obdrží kopii formuláře informovaného souhlasu.

Je-li to možné, bude před podepsáním informovaného souhlasu nabídnuta doba na rozmyšlenou v délce několika hodin během čekací doby na operaci. Pokud účastníci nepožadují čas na zvážení, může prohlášení o informovaném souhlasu podepsat bezprostředně po informační schůzce matka účastníka nebo rodiče účastníka a zkoušejícího (nebo výzkumného týmu, kterému byla tato odpovědnost přidělena zkoušejícím) . Po podpisu informovaného souhlasu bude účastníkovi nabídnuta jeho kopie. Podepsaný informovaný souhlas je nezbytným předpokladem pro zahájení jakýchkoli postupů souvisejících se studií.