O sistema imunológico inato intestinal em recém-nascidos. Desenvolvimento e Inflamação na Saúde e na Doença (INTINE)

1. Estudo NEC 1.1. Critérios de inclusão Bebês prematuros nascidos < 32 semanas de IG. O número total a incluir será de 200 1.2. Critérios de exclusão Nascidos prematuros com doenças congênitas ou outras condições graves podem adiar a participação.

Situações em que a recolha de tecido durante a cirurgia é impossível ou problemática, por ex. devido ao comprimento restante do intestino vital são avaliados como muito curtos de acordo com o critério do cirurgião operador.

1.3. Desenho do estudo Os bebês serão incluídos logo após o nascimento, após obtenção do consentimento com base em informações escritas e verbais. Amostras fecais serão coletadas desde o primeiro dia de vida e semanalmente durante as semanas seguintes até a alta para investigar a composição do microbioma fecal em relação ao desenvolvimento de NEC e ao efeito da terapia médica.

Em caso de desenvolvimento de ECN com necessidade de cirurgia, o intestino afetado será ressecado e serão estabelecidos estomas. Amostras de conteúdo fecal e tecido são coletadas do intestino proximal e distal ao intestino dividido. No momento da reversão dos estomas, o tecido será coletado proximal e distal da divisão para investigar o desenvolvimento do intestino durante o início da vida, bem como os potenciais efeitos nutricionais na maturidade intestinal. Os bebês que não são submetidos à cirurgia servem como controle, aqueles que são tratados para ECN apenas com antibióticos serão incluídos em uma subanálise comparando o microbioma dos bebês que precisam de cirurgia.

1.4. Amostragem 1.4.1. Amostras fecais As amostras fecais são coletadas o mais rápido possível após o nascimento e uma vez por semana até a alta. As fezes são raspadas da fralda assim que aparecem. A quantidade deve corresponder a uma unha. Duas amostras são coletadas em cada ponto de tempo. As faces serão armazenadas em tubo apropriado, após a coleta, o conteúdo é misturado com tampão (soro fisiológico) 1:2 antes de congelar a -600 graus C. Conteúdo fecal coletado na cirurgia primária e na reversão do estoma, as amostras são preparadas de forma semelhante.

1.4.2. Amostras intestinais Na cirurgia, uma amostra de tecido da extremidade proximal e distal do intestino ressecado e do intestino remanescente é retirada e congelada imediatamente após a coleta e armazenada a -800°C. Para poder coletar o maior número possível de amostras de tecido, nossa estratégia será congelar rapidamente pelo menos 4 amostras (aproximadamente 1 cm2) do tecido ressecado; 2 do local saudável e 2 do local doente do intestino. Uma ou mais amostras serão preparadas para análise recente na DTU (somente de bebês do Rigshospitalet). Na reversão do estoma, o tecido será retirado do local do estoma e da extremidade proximal do intestino desviado. Todos os tecidos serão transferidos para um biobanco hospedado pela OPEN no Hospital Universitário de Odense.

1.5. Resultados 1.5.1. Primário Investigar o papel da microbiota no desenvolvimento de ECN e alterações associadas no sistema imunológico intestinal naqueles que serão operados 1.5.2. Secundário: Dados demográficos como IG, PN, tipo de nascimento e índice de Apgar. Clínico: Crescimento, tipo de nutrição, número de dias em NPT, número de dias com cateter venoso central e tratamento médico. 1.6. Informação e consentimento Bebês prematuros internados no Departamento de Terapia Intensiva de Bebês e Crianças, Rigshospitalet ou no Departamento de Neonatologia, OUH serão avaliados quanto à elegibilidade. As informações necessárias serão entregues aos pesquisadores. Para as crianças que atendam aos critérios de inclusão, os pais serão abordados e informados sobre o projeto e solicitada a participação no estudo e seu consentimento informado por escrito. O consentimento dos pais para participar do estudo deve ser documentado no prontuário eletrônico do paciente. O consentimento informado deve ser obtido antes da coleta de quaisquer amostras para o projeto. Se os pais desejarem, poderão ter acesso a um espectador de entre o pessoal sem relação direta com o projeto de investigação, e também terão a possibilidade de trazer consigo um avaliador. Além de informações escritas e orais sobre o estudo, o panfleto "Før du beslutter dig: Om at være forsøgsperson i sundhedsvidenskabelige forsøg" da VEK, juntamente com o panfleto "Forsøgspersonens rettigheder i et sundhedsvidenskabeligt forskningsprojekt'' serão entregues aos pais. Se os pais consentirem, eles receberão uma cópia do termo de consentimento livre e esclarecido.

Se possível, será oferecido um período de consideração de 24 horas antes da assinatura do consentimento informado, caso em que uma nova reunião (triagem) será agendada. Se os participantes não necessitarem de tempo para consideração, a declaração de consentimento informado poderá ser assinada imediatamente após a reunião de informação pela mãe do participante ou pelos pais do participante e do investigador (ou pela equipe de pesquisa que teve esta responsabilidade atribuída pelo investigador) . Quando o consentimento informado for assinado, será oferecida ao participante uma cópia. O consentimento informado assinado é um pré-requisito para o início da triagem ou de qualquer procedimento relacionado ao estudo.

1. Estudo da atresia 1.1. Inclusão Todos os recém-nascidos e crianças até 1 ano precisam ser submetidos a cirurgia intestinal devido à atresia em qualquer local do intestino. Prevê-se uma inclusão de um total de 75 pacientes.

1.2. Exclusão Para bebês e crianças, a amostragem de tecido intestinal comprometeria a cirurgia e a saúde do paciente.

1.3. Desenho do estudo Bebês com malformações congênitas terão que se submeter a uma cirurgia programada para ressecção e/ou anastomose da área afetada do intestino, e alguns receberão um estoma que necessitará de reversão posterior. Na cirurgia primária, amostras fecais e tecido intestinal serão coletadas proximal e distal à patologia. Nos casos com estoma, e quando a criança for submetida posteriormente a cirurgia de reversão, serão coletadas amostras de tecido das extremidades proximal e distal do intestino juntamente com amostras fecais.

1.4. Amostragem 1.4.1. Amostras fecais Amostras fecais são coletadas o mais rápido possível após a operação primária e uma vez por semana até a alta. As fezes são retiradas da fralda assim que esta aparece. A quantidade deve corresponder a uma unha. Duas amostras são coletadas em cada ponto de tempo. As fezes serão armazenadas em tubo apropriado, após a coleta, o conteúdo é misturado com tampão (soro fisiológico) 1:2 antes de congelar a -600 graus C. Conteúdo fecal coletado na cirurgia primária e na reversão do estoma, as amostras são preparadas de forma semelhante.

1.4.2. Amostras intestinais Na cirurgia, 2 ou mais amostras de tecido dos intestinos proximal e distal serão coletadas. Para podermos coletar o maior número possível de amostras de tecido, nossa estratégia será congelar rapidamente pelo menos 4 amostras (aproximadamente 1 cm2) do tecido ressecado; 2 da parte proximal e distal, respectivamente. Uma ou mais amostras serão preparadas para análise recente na DTU (somente de bebês no Rigshospitalet). O mesmo procedimento será realizado na reversão do estoma. Todos os tecidos serão, após o término do estudo, transferidos para um biobanco hospedado pela OPEN no Hospital Universitário de Odense.

1.5. Resultados: 1.5.1. Constituição primária e desenvolvimento do sistema imunitário intestinal e colonização bacteriana intestinal ao longo do tempo 1.5.2. Dados demográficos secundários, como IG, PN, tipo de nascimento e índice de Apgar. Clínico: crescimento, tipo de nutrição, tratamento médico e evolução da doença. 1.6. Informação e consentimento Bebês nascidos com malformação congênita no trato gastrointestinal que necessita de cirurgia serão avaliados quanto à elegibilidade. As informações necessárias serão entregues aos pesquisadores. Para as crianças que atendam aos critérios de inclusão, os pais serão abordados e informados sobre o projeto e solicitada a participação no estudo e seu consentimento informado por escrito. O consentimento dos pais para participar do estudo deve ser documentado no prontuário eletrônico do paciente. O consentimento informado deve ser obtido antes da coleta de quaisquer amostras para o projeto. As informações escritas e orais serão realizadas pela equipe do Departamento de Cuidados Intensivos de Bebês e Crianças, Rigshospitalet, Departamento de Cirurgia Pediátrica, Rigshospitalet, Departamento de Cirurgia Pediátrica, OUH ou Departamento de Neonatologia, OUH. Se a família desejar, poderá ter acesso a um espectador de entre o pessoal sem relação direta com o projeto de investigação, e também terá a possibilidade de trazer consigo um avaliador. Além de informações escritas e orais sobre o estudo, o panfleto "Før du beslutter dig: Om at være forsøgsperson i sundhedsvidenskabelige forsøg" da VEK, juntamente com o panfleto "Forsøgspersonens rettigheder i et sundhedsvidenskabeligt forskningsprojekt'' serão entregues aos pais. Se os pais consentirem, eles receberão uma cópia do termo de consentimento livre e esclarecido.

Se possível, será oferecido um período de consideração de algumas horas durante o período de espera pela cirurgia antes da assinatura do consentimento informado. Se os participantes não necessitarem de tempo para consideração, a declaração de consentimento informado poderá ser assinada imediatamente após a reunião de informação pela mãe do participante ou pelos pais do participante e do investigador (ou pela equipe de pesquisa que teve esta responsabilidade atribuída pelo investigador) . Quando o consentimento informado for assinado, será oferecida ao participante uma cópia. O consentimento informado assinado é um pré-requisito para o início de quaisquer procedimentos relacionados ao estudo.