Il sistema immunitario innato intestinale nei neonati. Sviluppo e infiammazione in salute e malattia (INTINE)

1. Studio NEC 1.1. Criteri di inclusione Neonati prematuri nati < settimana GA 32. Il numero totale da includere sarà 200 1.2. Criteri di esclusione I nati prematuri con malattie congenite o altre condizioni gravi possono rinviare la partecipazione.

Situazioni in cui il prelievo di tessuto durante l'intervento chirurgico è impossibile o problematico, ad es. a causa della lunghezza residua dell'intestino vitale vengono valutati, a discrezione del chirurgo operante, troppo corti.

1.3. Disegno dello studio I neonati verranno inclusi subito dopo la nascita dopo aver ottenuto il consenso basato su informazioni scritte e verbali. Verranno raccolti campioni fecali dal primo giorno di vita e settimanalmente per le settimane successive fino alla dimissione per indagare la composizione del microbioma fecale in relazione allo sviluppo di NEC e all'effetto della terapia medica.

In caso di sviluppo di NEC che richieda un intervento chirurgico, l'intestino interessato verrà asportato e verranno create delle stomie. Campioni di contenuto fecale e tessuto vengono raccolti dall'intestino prossimale e distale all'intestino diviso. Al momento dell'inversione della stomia, il tessuto verrà raccolto sia prossimale che distale dalla divisione per studiare lo sviluppo dell'intestino durante i primi anni di vita nonché i potenziali effetti nutrizionali sulla maturità intestinale. I neonati che non vengono sottoposti a intervento chirurgico fungono da controlli, quelli che sono trattati per NEC solo con antibiotici, saranno inclusi in una sottoanalisi che confronta il microbioma dei neonati che necessitano di un intervento chirurgico.

1.4. Campionamento 1.4.1. Campioni fecali I campioni fecali vengono raccolti il ​​prima possibile dopo la nascita e una volta alla settimana fino alla dimissione. Le feci vengono raschiate via dal pannolino non appena compaiono. L'importo deve corrispondere a un'unghia. Vengono raccolti due campioni in ogni momento. I volti verranno conservati in una provetta appropriata, dopo la raccolta, il contenuto verrà miscelato con un tampone (soluzione salina) 1:2 prima del congelamento a -600 gradi C. Contenuto fecale raccolto durante l'intervento chirurgico primario e all'inversione della stomia, i campioni vengono preparati in modo simile.

1.4.2. Campioni intestinali Durante l'intervento chirurgico, un campione di tessuto dall'estremità prossimale e distale dell'intestino resecato e dell'intestino residuo viene prelevato e congelato immediatamente dopo la raccolta e conservato a -800 C. Per poter raccogliere il maggior numero possibile di campioni di tessuto, la nostra strategia sarà necessario congelare almeno 4 campioni (circa 1 cm2) del tessuto asportato; 2 dalla sede sana e 2 dalla sede malata dell'intestino. Uno o più campioni verranno preparati per l'analisi a fresco presso il DTU (solo da neonati del Rigshospitalet). Al momento dell'inversione della stomia, il tessuto verrà prelevato dal sito dello stoma e dall'estremità prossimale dell'intestino deviato. Tutti i tessuti verranno trasferiti in una biobanca ospitata da OPEN presso l'Ospedale Universitario di Odense.

1.5. Risultati 1.5.1. Primario Indagare il ruolo del microbiota nello sviluppo della NEC e i cambiamenti associati nel sistema immunitario intestinale nei soggetti che verranno operati 1.5.2. Secondario: dati demografici come GA, peso corporeo, tipo di nascita e punteggio di Apgar. Clinico: crescita, tipo di alimentazione, numero di giorni di TPN, numero di giorni con catetere venoso centrale e cure mediche. 1.6. Informazioni e consenso I neonati prematuri ricoverati presso il Dipartimento di terapia intensiva dei neonati e dei bambini piccoli, Rigshospitalet o il Dipartimento di neonatologia, OUH verranno sottoposti a screening per l'idoneità. Le informazioni necessarie verranno consegnate ai ricercatori. Per i bambini che soddisfano i criteri di inclusione, i genitori verranno avvicinati e informati sul progetto e verrà loro richiesta la partecipazione allo studio e il loro consenso informato scritto. Il consenso dei genitori a partecipare allo studio dovrà essere documentato nella cartella clinica elettronica del paziente. Il consenso informato deve essere ottenuto prima della raccolta di eventuali campioni per il progetto. Se i genitori lo desiderano, potranno avere accesso ad un terzo del personale senza alcun rapporto diretto con il progetto di ricerca, e sarà data loro anche la possibilità di portare con sé un valutatore. Oltre alle informazioni scritte e orali sullo studio, ai genitori verrà consegnato l'opuscolo "Før du beslutter dig: Om at være forsøgsperson i sundhedsvidenskabelige forsøg" di VEK, insieme all'opuscolo "Forsøgspersonens rettigheder i et sundhedsvidenskabeligt forskningsprojekt". Se i genitori acconsentono, riceveranno una copia del modulo di consenso informato.

Se possibile, verrà offerto un periodo di riflessione di 24 ore prima di firmare il consenso informato, nel qual caso verrà programmato un nuovo incontro (lo screening). Se i partecipanti non necessitano di tempo per l'esame, la dichiarazione di consenso informato può essere firmata immediatamente dopo l'incontro informativo dalla madre del partecipante o dai genitori del partecipante e dello sperimentatore (o dal gruppo di ricerca a cui è stata assegnata questa responsabilità dallo sperimentatore) . Una volta firmato il consenso informato, al partecipante verrà offerta una copia. Il consenso informato firmato è un prerequisito per lo screening o per l'avvio di qualsiasi procedura relativa allo studio.

1. Studio sull'atresia 1.1. Inclusione Tutti i neonati e i bambini fino a 1 anno di età devono essere sottoposti a intervento chirurgico intestinale a causa di atresia in qualsiasi sito dell'intestino. Si prevede l'inclusione di un totale di 75 pazienti.

1.2. Esclusione Per neonati e bambini il prelievo di tessuto intestinale comprometterebbe l'intervento chirurgico e la salute del paziente.

1.3. Disegno dello studio I neonati con malformazioni congenite dovranno essere sottoposti a un intervento chirurgico programmato per resecare e/o anastomizzare l'area interessata dell'intestino e alcuni riceveranno una stomia che necessita di una successiva inversione. Durante l'intervento chirurgico primario, verranno raccolti campioni fecali e tessuto intestinale prossimale e distale alla patologia. Nei casi con stomia e quando il bambino verrà sottoposto a un successivo intervento chirurgico di inversione, verranno raccolti campioni di tessuto dalle estremità prossimale e distale dell'intestino insieme a campioni fecali.

1.4. Campionamento 1.4.1. Campioni fecali I campioni fecali vengono raccolti il ​​prima possibile dopo l'operazione primaria e una volta alla settimana fino alla dimissione. Le feci vengono raschiate dal pannolino non appena compaiono. L'importo deve corrispondere a un'unghia. Vengono raccolti due campioni in ogni momento. Le feci verranno conservate in un'apposita provetta, dopo la raccolta il contenuto verrà miscelato con un tampone (soluzione salina) 1:2 prima del congelamento a -600 gradi C. Contenuto fecale raccolto durante l'intervento chirurgico primario e all'inversione della stomia, i campioni vengono preparati in modo simile.

1.4.2. Campioni intestinali Durante l'intervento verranno raccolti 2 o più campioni di tessuto dall'intestino prossimale e distale. Per poter raccogliere il maggior numero possibile di campioni di tessuto, la nostra strategia sarà quella di congelare almeno 4 campioni (circa 1 cm2) del tessuto asportato; 2 rispettivamente dalla parte prossimale e distale. Uno o più campioni verranno preparati per l'analisi a fresco presso il DTU (solo da neonati presso il Rigshospitalet). La stessa procedura verrà eseguita all'inversione della stomia. Dopo la conclusione dello studio, tutti i tessuti verranno trasferiti in una biobanca ospitata da OPEN presso l'Ospedale universitario di Odense.

1.5. Risultati: 1.5.1. Costituzione primaria e sviluppo del sistema immunitario intestinale e colonizzazione batterica intestinale nel tempo 1.5.2. Dati demografici secondari come GA, peso corporeo, tipo di nascita e punteggio Apgar Clinico: crescita, tipo di alimentazione, cure mediche e decorso della malattia. 1.6. Informazioni e consenso I neonati nati con una malformazione congenita nel tratto gastrointestinale che necessita di un intervento chirurgico saranno sottoposti a screening per l'idoneità. Le informazioni necessarie verranno consegnate ai ricercatori. Per i bambini che soddisfano i criteri di inclusione, i genitori verranno avvicinati e informati sul progetto e verrà loro richiesta la partecipazione allo studio e il loro consenso informato scritto. Il consenso dei genitori a partecipare allo studio dovrà essere documentato nella cartella clinica elettronica del paziente. Il consenso informato deve essere ottenuto prima della raccolta di qualsiasi campione per il progetto. Le informazioni scritte e orali saranno fornite dal personale del Dipartimento di terapia intensiva dei neonati e dei bambini piccoli, Rigshospitalet, Dipartimento di chirurgia pediatrica, Rigshospitalet, Dipartimento di chirurgia pediatrica, OUH o il Dipartimento di Neonatologia, OUH. Se la famiglia lo desidera, potrà avere accesso ad un terzo del personale senza alcun rapporto diretto con il progetto di ricerca e avrà anche la possibilità di portare con sé un valutatore. Oltre alle informazioni scritte e orali sullo studio, ai genitori verrà consegnato l'opuscolo "Før du beslutter dig: Om at være forsøgsperson i sundhedsvidenskabelige forsøg" di VEK, insieme all'opuscolo "Forsøgspersonens rettigheder i et sundhedsvidenskabeligt forskningsprojekt". Se i genitori acconsentono, riceveranno una copia del modulo di consenso informato.

Se possibile, verrà offerto un periodo di riflessione di alcune ore durante il periodo di attesa per l'intervento chirurgico prima di firmare il consenso informato. Se i partecipanti non necessitano di tempo per l'esame, la dichiarazione di consenso informato può essere firmata immediatamente dopo l'incontro informativo dalla madre del partecipante o dai genitori del partecipante e dello sperimentatore (o dal gruppo di ricerca a cui è stata assegnata questa responsabilità dallo sperimentatore) . Una volta firmato il consenso informato, al partecipante verrà offerta una copia. Il consenso informato firmato è un prerequisito per l'avvio di qualsiasi procedura relativa allo studio.