El sistema inmunológico innato intestinal en los recién nacidos. Desarrollo e inflamación en la salud y la enfermedad. (INTINE)

1. Estudio NEC 1.1. Criterios de inclusión Recién nacidos prematuros <semana 32 de AG. El número total a incluir será de 200 1.2. Criterios de exclusión Los nacidos prematuros con enfermedades congénitas u otras condiciones graves podrán diferir la participación.

Situaciones en las que la recolección de tejido en la cirugía es imposible o problemática, p. debido a la longitud restante del intestino vital se consideran demasiado cortos según el criterio del cirujano.

1.3. Diseño del estudio Los bebés se incluirán inmediatamente después del nacimiento después de obtener el consentimiento basado en información escrita y verbal. Se recolectarán muestras fecales desde el día 1 de vida y semanalmente durante las siguientes semanas hasta el alta para investigar la composición del microbioma fecal en relación con el desarrollo de ECN y el efecto de la terapia médica.

En caso de que se desarrolle ECN con necesidad de cirugía, se resecará el intestino afectado y se establecerán estomas. Se recogen muestras de contenido fecal y tejido del intestino proximal y distal al intestino dividido. En el momento de la reversión de los estomas, el tejido se recolectará tanto proximal como distal de la división para investigar el desarrollo del intestino durante las primeras etapas de la vida, así como los posibles efectos nutricionales sobre la madurez intestinal. Los bebés que no se someten a cirugía sirven como controles; aquellos que reciben tratamiento para la ECN solo con antibióticos se incluirán en un subanálisis que compara el microbioma de los bebés que necesitan cirugía.

1.4. Muestreo 1.4.1. Muestras fecales Las muestras fecales se recolectan lo antes posible después del nacimiento y una vez por semana hasta el alta. Las heces se raspan del pañal tan pronto como aparecen. La cantidad debe corresponder a una uña. Se recolectan dos muestras en cada momento. Las caras se almacenarán en un tubo apropiado; después de la recolección, el contenido se mezcla con un tampón (solución salina) 1:2 antes de congelarlo a -600 grados C. El contenido fecal se recolecta en la cirugía primaria y en la reversión del estoma, las muestras se preparan de manera similar.

1.4.2. Muestras intestinales En la cirugía, se toma una muestra de tejido del extremo proximal y distal del intestino resecado y del intestino remanente y se congela inmediatamente después de la recolección y se almacena a -800 C. Para poder recolectar tantas muestras de tejido como sea posible, nuestra estrategia será congelar instantáneamente al menos 4 muestras (aproximadamente 1 cm2) del tejido resecado; 2 del sitio sano y 2 del sitio enfermo del intestino. Se prepararán una o más muestras para análisis en fresco en DTU (solo de bebés de Rigshospitalet). En la reversión del estoma, se tomará tejido del sitio del estoma y del extremo proximal del intestino desviado. Todo el tejido se transferirá a un biobanco alojado por OPEN en el Hospital Universitario de Odense.

1.5. Resultados 1.5.1. Primario Investigar el papel de la microbiota en el desarrollo de ECN y los cambios asociados en el sistema inmunológico intestinal en aquellos que serán operados 1.5.2. Secundario: Datos demográficos como EG, BW, tipo de nacimiento y puntaje de Apgar. Clínicos: Crecimiento, tipo de nutrición, número de días con NPT, número de días con catéter venoso central y tratamiento médico. 1.6. Información y consentimiento Los bebés prematuros admitidos en el Departamento de Cuidados Intensivos de Bebés y Niños Pequeños, Rigshospitalet o el Departamento de Neonatología, OUH serán evaluados para determinar su elegibilidad. La información necesaria será entregada a los investigadores. Para los niños que cumplan con los criterios de inclusión, se acercará a los padres y se les informará sobre el proyecto y se les pedirá participación en el estudio y su consentimiento informado por escrito. El consentimiento de los padres para participar en el estudio debe quedar documentado en la historia clínica electrónica del paciente. Se debe obtener el consentimiento informado antes de la recolección de cualquier muestra para el proyecto. Si los padres lo desean, podrán tener acceso a un testigo de entre el personal sin relación directa con el proyecto de investigación, y también se les dará la posibilidad de traer un evaluador. Además de la información escrita y oral sobre el estudio, se entregará a los padres el folleto "Før du beslutter dig: Om at være forsøgsperson i sundhedsvidenskabelige forsøg" de VEK, junto con el folleto "Forsøgspersonens retigheder i et sundhedsvidenskabeligt forskningsprojekt". Si los padres dan su consentimiento, recibirán una copia del formulario de consentimiento informado.

De ser posible, se ofrecerá un período de consideración de 24 horas antes de la firma del consentimiento informado, en cuyo caso se programará una nueva reunión (el screening). Si los participantes no requieren tiempo para su consideración, la declaración de consentimiento informado podrá ser firmada inmediatamente después de la reunión informativa por la madre del participante o los padres del participante y el investigador (o el equipo de investigación al que el investigador le haya asignado esta responsabilidad). . Cuando se firme el consentimiento informado, se ofrecerá una copia al participante. El consentimiento informado firmado es un requisito previo para iniciar la selección o cualquier procedimiento relacionado con el estudio.

1. Estudio de atresia 1.1. Inclusión Todos los recién nacidos y niños de hasta 1 año deben someterse a una cirugía intestinal debido a la atresia en cualquier sitio del intestino. Se prevé una inclusión de un total de 75 pacientes.

1.2. Exclusión Para bebés y niños, la toma de muestras de tejido intestinal comprometería la cirugía y la salud del paciente.

1.3. Diseño del estudio Los bebés con malformaciones congénitas deberán someterse a una cirugía programada para resecar y/o anastomosar el área afectada del intestino, y algunos recibirán un estoma que deberá revertirse posteriormente. En la cirugía primaria, se recolectarán muestras fecales y tejido intestinal proximal y distal a la patología. En los casos con estoma, y ​​cuando el niño será sometido posteriormente a una cirugía de reversión, se recolectarán muestras de tejido de los extremos proximal y distal del intestino junto con muestras fecales.

1.4. Muestreo 1.4.1. Muestras fecales Las muestras fecales se recolectan lo antes posible después de la operación primaria y una vez por semana hasta el alta. Las heces se raspan del pañal tan pronto como aparecen. La cantidad debe corresponder a una uña. Se recolectan dos muestras en cada momento. Las heces se almacenarán en un tubo apropiado, después de la recolección, el contenido se mezcla con un tampón (solución salina) 1:2 antes de congelarse a -600 grados C. El contenido fecal se recolecta en la cirugía primaria y en la reversión del estoma, las muestras se preparan de manera similar.

1.4.2. Muestras intestinales En la cirugía se recolectarán 2 o más muestras de tejido de los intestinos proximal y distal. Para poder recolectar tantas muestras de tejido como sea posible, nuestra estrategia será congelar al menos 4 muestras (aproximadamente 1 cm2) del tejido resecado; 2 de la parte proximal y distal, respectivamente. Se prepararán una o más muestras para análisis en fresco en DTU (solo de bebés en Rigshospitalet). Se realizará el mismo procedimiento en la reversión del estoma. Una vez finalizado el estudio, todo el tejido se transferirá a un biobanco alojado por OPEN en el Hospital Universitario de Odense.

1.5. Resultados: 1.5.1. Constitución primaria y desarrollo del sistema inmunológico intestinal y colonización bacteriana intestinal a lo largo del tiempo 1.5.2. Datos demográficos secundarios como GA, BW, tipo de nacimiento y puntaje de Apgar. Clínicos: crecimiento, tipo de nutrición, tratamiento médico y curso de la enfermedad. 1.6. Información y consentimiento Los bebés que nacen con una malformación congénita en el tracto gastrointestinal que necesita cirugía serán evaluados para determinar su elegibilidad. La información necesaria será entregada a los investigadores. Para los niños que cumplan con los criterios de inclusión, se acercará a los padres y se les informará sobre el proyecto y se les pedirá participación en el estudio y su consentimiento informado por escrito. El consentimiento de los padres para participar en el estudio debe quedar documentado en la historia clínica electrónica del paciente. Se debe obtener el consentimiento informado antes de la recolección de cualquier muestra para el proyecto. La información escrita y oral será realizada por personal del Departamento de Cuidados Intensivos de Bebés y Niños Pequeños, Rigshospitalet, Departamento de Cirugía Pediátrica, Rigshospitalet, Departamento de Cirugía Pediátrica, OUH o el Departamento de Neonatología, OUH. Si la familia lo desea, podrá tener acceso a un testigo de entre el personal sin relación directa con el proyecto de investigación, y también se le dará la posibilidad de acompañar a un asesor. Además de la información escrita y oral sobre el estudio, se entregará a los padres el folleto "Før du beslutter dig: Om at være forsøgsperson i sundhedsvidenskabelige forsøg" de VEK, junto con el folleto "Forsøgspersonens rettigheder i et sundhedsvidenskabeligt forskningsprojekt". Si los padres dan su consentimiento, recibirán una copia del formulario de consentimiento informado.

De ser posible, se ofrecerá un período de consideración de algunas horas durante el período de espera para la cirugía antes de firmar el consentimiento informado. Si los participantes no requieren tiempo para su consideración, la declaración de consentimiento informado podrá ser firmada inmediatamente después de la reunión informativa por la madre del participante o los padres del participante y el investigador (o el equipo de investigación al que el investigador le haya asignado esta responsabilidad). . Cuando se firme el consentimiento informado, se ofrecerá una copia al participante. El consentimiento informado firmado es un requisito previo para que se inicie cualquier procedimiento relacionado con el estudio.