Genotypisierung von zellfreier Ebus-tbna-Überstands-DNA in Nsclc (CELTICS)

Die weite Verbreitung der „Flüssigbiopsie“-Diagnostik bei der Behandlung von Krebspatienten im fortgeschrittenen Stadium unterstreicht den Wunsch nach einem verbesserten Zugang zum Tumor, der eine genaue Tumor-Genotypisierung ermöglicht (1). Die Genotypisierung von Plasma-cfDNA ist jetzt Routine zum Nachweis von EGFR-Treibermutationen bei der Diagnose von NSCLC oder zum Nachweis der EGFR-T790M-Mutation nach TKI-Resistenz und ist ein neuer Ansatz zum Nachweis anderer Treiber (HER2- oder BRAF-Mutationen, ALK oder ROS1 Fusionen…) (2) oder die Schätzung der Tumormutationslast (TMB) (3). Die empfindlichsten Plasma-Genotypisierungsplattformen haben jedoch immer noch eine Empfindlichkeit von nur 70 % bis 80 %, sodass ein negatives Ergebnis eine Bestätigung durch eine Gewebebiopsie erfordert. Dies stellt eine klinische Herausforderung dar, da eine negative Plasma-Genotypisierung mit einer begrenzteren Ausbreitung von Metastasen und einer geringeren Tumorlast korreliert, sodass die Biopsie dieser Patienten noch schwieriger sein kann. Da die invasive Biopsie ein integraler Bestandteil der diagnostischen Strategie bleibt, werden Methoden benötigt, um die Ausbeute dieser Biopsieverfahren zu maximieren.

Es besteht derzeit ein Paradoxon zwischen dem Bedarf an großen Gewebemengen für die Multiplex-Analyse einer zunehmenden Anzahl von zielgerichteten Treibern und Markern für das Ansprechen auf eine Immuntherapie (PD-L1, TMB) und der Entwicklung minimalinvasiver Biopsieverfahren, die zu begrenzten Proben führen . Bis zu 25 % der Patienten werden daher ohne Kenntnis des molekularen Profils ihres Tumors behandelt (4). Insbesondere werden 20 % der Endobronchialsonographie-Transbronchialnadelpunktionen (EBUS-TBNA) nach zeit- und gewebeaufwendigen und teilweise nicht erforderlichen diagnostischen Schritten (Resistenzeinstellung) wegen Gewebemangels von der Genotypisierung abgelehnt (5). Zirkulierende Tumor-DNA ist ein neuer Ansatz für die Krebs-Genotypisierung, aber die Empfindlichkeit ist auf 70–80 % (6) durch inkonsistente Tumorausscheidung und niedrige DNA-Konzentrationen begrenzt, so dass die Gewebebiopsie immer noch Routine ist. Außerdem beträgt die Durchführbarkeit der TMB-Beurteilung auf Gewebe nur 60 % (wahrscheinlich viel weniger auf EBUS-TBNA-Proben) (7) und etwa 80 % in Plasma (Blut-TMB, bTMB) (3).

Das Vorhandensein von cfDNA in mehreren biologischen Flüssigkeiten und die Machbarkeit des Nachweises von interessierenden Mutationen (die normalerweise nur auf EGFR abzielen) in diesen Flüssigkeiten (Urin, Pleuraflüssigkeit, CSF) wurden eindeutig nachgewiesen (8-12), wobei Blut am umfassendsten untersucht wurde flüssiges Biopsiesubstrat bei fortgeschrittenem NSCLC.

Darüber hinaus haben wir in einer Proof-of-Concept-Studie gezeigt, bei der verschiedene FNA-Proben bei einer begrenzten Anzahl von Patienten untersucht wurden, dass der Überstand von Zytologieproben (normalerweise verworfen) eine reichhaltige DNA-Quelle ist. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass überstehende freie DNA (sfDNA) für die Grundlinien- und Resistenz-Genotypisierung verwendet werden kann (13).