Genotipizzazione del DNA libero cellulare supernante Ebus-tbna in Nsclc (CELTICS)

L'ampia diffusione della diagnostica "biopsia liquida" nella cura dei pazienti affetti da cancro avanzato evidenzia il desiderio di un migliore accesso al tumore che consenta un'accurata genotipizzazione del tumore (1). La genotipizzazione del cfDNA plasmatico è ora di routine per il rilevamento delle mutazioni del driver EGFR alla diagnosi di NSCLC o per il rilevamento della mutazione EGFR T790M dopo la resistenza a TKI ed è un approccio emergente per il rilevamento di altri driver (mutazioni HER2 o BRAF, ALK o ROS1 fusioni…) (2) o la stima del carico di mutazione tumorale (TMB) (3). Tuttavia, le piattaforme di genotipizzazione del plasma più sensibili hanno ancora una sensibilità solo del 70%-80%, tale che un risultato negativo richiede la conferma della biopsia tissutale. Ciò rappresenta una sfida clinica perché la genotipizzazione plasmatica negativa è correlata a una diffusione metastatica più limitata e a un carico tumorale inferiore, tanto che la biopsia di questi pazienti può essere ancora più impegnativa. Poiché la biopsia invasiva rimane parte integrante della strategia diagnostica, sono necessari metodi per massimizzare la resa di queste procedure bioptiche.

Esiste un paradosso attuale tra la necessità di grandi quantità di tessuto per l'analisi multiplex di un numero crescente di driver e marcatori mirabili di risposta alla terapia immunitaria (PD-L1, TMB) e lo sviluppo di procedure di biopsia minimamente invasive che si traducono in campioni limitati . Fino al 25% dei pazienti viene quindi trattato senza conoscere il profilo molecolare del proprio tumore (4). In particolare, il 20% dell'aspirazione con ago transbronchiale per ecografia endobronchiale (EBUS-TBNA) viene rifiutato dalla genotipizzazione a causa della mancanza di tessuto (5) dopo passaggi diagnostici che consumano tempo e tessuto che a volte non sono richiesti (impostazione della resistenza). Il DNA tumorale circolante è un approccio emergente per la genotipizzazione del cancro, ma la sensibilità è limitata al 70-80% (6) dall'incoerente diffusione del tumore e dalle basse concentrazioni di DNA, quindi la biopsia tissutale è ancora di routine. Inoltre, la fattibilità della valutazione del TMB sui tessuti è solo del 60% (probabilmente molto meno su campioni EBUS-TBNA) (7) e circa l'80% nel plasma (TMB di sangue, bTMB) (3).

La presenza di cfDNA in diversi fluidi biologici e la fattibilità di rilevare mutazioni di interesse (solitamente mirate solo all'EGFR) in questi fluidi (urina, liquido pleurico, CSF) sono state chiaramente dimostrate (8-12), mentre il sangue è il più studiato substrato per biopsia liquida nel NSCLC avanzato.

Inoltre, abbiamo dimostrato in uno studio proof of concept, esaminando vari campioni di FNA in un numero limitato di pazienti, che il supernatante dei campioni citologici (solitamente scartato) è una ricca fonte di DNA. I nostri risultati suggeriscono che il DNA libero supernatante (sfDNA) può essere utilizzato per la genotipizzazione di base e di resistenza (13).