Un estudio de marcadores predictivos y pronósticos en pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas

1. Establecer una recopilación retrospectiva de datos clínicos, histopatológicos, de tratamiento y de seguimiento (patológico clínico) de casos previos de cáncer de pulmón de células no pequeñas (CPCNP).
2. Establecer una colección prospectiva de información patológica clínica de pacientes con NSCLC con muestras de sangre y tejido correspondientes
3. Descubrir y validar biomarcadores moleculares de supervivencia y resultado del tratamiento en NSCLC

Una de las dificultades actuales en el manejo del cáncer de pulmón es la decisión de tratar y el tipo de tratamiento a seleccionar. Por lo tanto, existe la necesidad de marcadores adicionales de pronóstico (indicativos de la agresividad de la enfermedad) y predictivos (indicativos de la probable respuesta al tratamiento) para el cáncer de pulmón. Para llevar a cabo un programa exitoso de marcadores pronósticos y predictivos, se requieren varios factores, entre ellos: una base de datos integral que vincule las características clínicas, histopatológicas, de tratamiento y de resultado de cada caso, una colección de muestras vinculadas a la base de datos que sea adecuada para la prueba de marcadores candidatos , y un nivel de experiencia multidisciplinario e interdepartamental en el manejo del cáncer de pulmón.

Objetivo 1:

Se realizará una revisión de los expedientes para extraer datos clínicos, de tratamiento y de seguimiento.

Objetivo 2:

Los pacientes de 21 años de edad o más con cáncer de pulmón de células no pequeñas recién diagnosticado y no tratado deberán ser contactados para obtener su consentimiento. Los pacientes serán identificados a través de los registros de patología y de la clínica de los investigadores del estudio. Después del consentimiento del sujeto, se obtendrán las características iniciales. Se obtendrán datos de seguimiento sobre las terapias recibidas y las toxicidades encontradas. Las muestras de tumores se obtendrán solo de pacientes con NSCLC que se sometan a cirugía como parte de la atención clínica de rutina. La pieza quirúrgica se enviará a Anatomía Patológica para verificar la adecuación de la muestra diagnóstica a la práctica habitual. Se recolectará sangre al inicio del estudio (o antes de cualquier tratamiento contra el cáncer) y se volverá a tomar una muestra en el momento de la recaída o la progresión de la enfermedad. La recolección implicará la extracción de 7 ml de sangre en un tubo Vacutainer CPT (Becton Dickinson, EE. UU.), centrifugación, extracción de una capa separada de células mononucleares (MNC), etiquetado seguido de almacenamiento por debajo de -80oC. La frecuencia de extracción de sangre será de 1 a 5 veces (7 a 35 ml en total). La cantidad de veces depende de si el cáncer de pulmón recae y, en la etapa avanzada, con qué frecuencia el cáncer de pulmón recae después del tratamiento. El ADN y el ARN serán extraídos por CSIS y almacenados en el espacio de congelación allí. Las muestras almacenadas se utilizarán para la investigación de marcadores pronósticos y predictivos de resultados y para el descubrimiento de nuevas alteraciones moleculares.

Objetivo 3:

Análisis de biomarcadores de tumor y sangre. La sangre se enriquecerá con células tumorales circulantes (CTC) usando métodos previamente optimizados (11) y el ADN se extraerá de CTC y del tumor usando Tri-Reagent (Molecular Research Center, Cincinatti, OH). El ADN se extraerá del tumor, CTC y células mononucleadas y se analizará en busca de mutaciones pulmonares somáticas mediante secuenciación (2). El ADN de la línea germinal se analizará en busca de genes relacionados con el riesgo genético de NSCLC y, para determinar las toxicidades del tratamiento, en busca de genes relacionados con las vías metabólicas de la quimioterapia para NSCLC.

La micromatriz de tejido (TMA) es un método de alto rendimiento para analizar grandes cantidades de tumores incluidos en parafina y fijados en formalina con un costo y esfuerzo mínimos. Para analizar la expresión de proteínas de supuesta relevancia para la función de EGFR, proliferación celular, angiogénesis, apoptosis, metástasis y hormonas, se utilizará TMA. También se analizarán PTEN y C/EBPa.