Studie prediktivních a prognostických markerů u pacientů s nemalobuněčným karcinomem plic

1. Sestavit retrospektivní kompilaci klinických, histopatologických, léčebných a sledovacích (klinicky patologických) dat předchozích případů nemalobuněčného karcinomu plic (NSCLC).
2. Založit prospektivní sběr klinických patologických informací od pacientů s NSCLC s odpovídajícími vzorky krve a tkání
3. Objevit a ověřit molekulární biomarkery přežití a výsledek léčby u NSCLC

Jednou ze současných obtíží v léčbě rakoviny plic je rozhodnutí o léčbě a typ léčby, který si vybrat. Existuje tedy potřeba dalších prognostických (indikujících agresivitu onemocnění) a prediktivních (indikujících pravděpodobnou odpověď na léčbu) markerů pro rakovinu plic. K provedení úspěšného programu prognostických a prediktivních markerů je zapotřebí několik faktorů, včetně: komplexní databáze propojující klinické, histopatologické, léčebné a výsledné charakteristiky každého případu, kolekce vzorků propojených s databází, která je vhodná pro testování kandidátních markerů a multidisciplinární, mezirezortní úroveň odborných znalostí v léčbě rakoviny plic.

Cíl 1:

Bude provedena revize záznamů o případu za účelem získání klinických, léčebných a následných údajů

Cíl 2:

Pro souhlas se musí oslovit pacienty ve věku 21 let a více s nově diagnostikovaným, neléčeným nemalobuněčným karcinomem plic. Pacienti budou identifikováni prostřednictvím patologických záznamů a z kliniky výzkumných pracovníků studie. Po souhlasu subjektu budou získány základní charakteristiky. Budou získány následné údaje o přijatých terapiích a zjištěných toxicitách. Vzorky nádoru budou odebírány pouze od pacientů s NSCLC, kteří podstoupí operaci v rámci běžné klinické péče. Chirurgický vzorek bude odeslán na patologii k ověření přiměřenosti diagnostického vzorku podle obvyklé praxe. Krev bude odebrána na začátku (nebo před jakoukoli protirakovinnou léčbou) a bude znovu odebrána v době relapsu nebo progrese onemocnění. Odběr bude zahrnovat odběr 7 ml krve do zkumavky Vacutainer CPT (Becton Dickinson, USA), centrifugaci, extrakci separované vrstvy mononukleárních buněk (MNC), značení s následným skladováním pod -80oC. Frekvence odběru krve bude asi 1-5krát (celkem 7-35ml). Počet případů závisí na tom, zda rakovina plic recidivuje a v pokročilém stadiu, jak často rakovina plic recidivuje po léčbě. DNA a RNA budou extrahovány CSIS a uloženy v mrazicím prostoru tam. Uložené vzorky budou použity pro zkoumání prognostických a prediktivních markerů výsledku a pro objevování nových molekulárních změn

Cíl 3:

Biomarkerová analýza nádoru a krve. Krev bude obohacena o cirkulující nádorové buňky (CTC) pomocí dříve optimalizovaných metod (11) a DNA bude extrahována z CTC a nádoru pomocí Tri-Reagent (Molecular Research Center, Cincinatti, OH). DNA bude extrahována z nádorových, CTC a mononukleárních buněk a testována na somatické plicní mutace sekvenováním (2). V zárodečné DNA budou analyzovány geny spojené s genetickým rizikem pro NSCLC a pro toxicitu léčby geny související s metabolickými cestami chemoterapie NSCLC.

Tissue microarray (TMA) je vysoce výkonná metoda analýzy velkého počtu tumorů fixovaných formalínem a zalitých v parafínu s minimálními náklady a úsilím. K analýze exprese proteinů domnělého významu pro funkci EGFR, buněčnou proliferaci, angiogenezi, apoptózu, metastázy a hormonální bude využita TMA. Rovněž budou analyzovány PTEN a C/EBPa.