Observación de la Treg en los pacientes con uveítis (OTUP)

La uveítis describe la inflamación que existe en el tracto uveal, pero el curso de la enfermedad tiene una gran variedad de manifestaciones. La uveítis (enfermedad inflamatoria intraocular) incluye enfermedades que amenazan la vista, como la enfermedad de Behcet, la retinocoroidopatía en perdigones, Vogt-Koyanagi-Harada, oftalmía simpática y sarcoidosis ocular, y puede ser de etiología infecciosa o autoinmune.

Las células Tr CD4+ CD25+ juegan un papel clave en el mantenimiento de la autotolerancia periférica al inhibir la activación y proliferación de células T no reactivas. Además de un efecto supresor directo sobre las células Tr CD4+CD25+. Las células Tr CD4+CD25+ pueden regular la respuesta inmune a través de las células dendríticas. Al igual que los linfocitos T citotóxicos y las células asesinas naturales, las células Tr CD4+CD25+ humanas activadas muestran una citotoxicidad dependiente de la perforina contra las células diana autólogas, incluidas las células T CD4+ y CD8+ activadas.

La uveoretinitis autoinmune experimental (EAU) es un modelo de uveítis. Actualmente se cree que las células T reguladoras en la uveítis son el agente etiológico de la uveítis porque los niveles de IFN-γ, IL-2 (interleucina-2), TNF (factor de necrosis tumoral alfa) están elevados en la retina durante la uveítis Después de la estimulación con IL- 2 se incrementó la expresión en PBMC (células mononucleares de sangre periférica) de sujetos sanos y pacientes con escleritis o uveítis. Mediante ELISA, confirmamos que la IL-2 inducía la secreción de la proteína en PBMC humanas y en células T CD4+ de ratón. El experimento encontró, mediante un ensayo de análisis de citoquinas intracelulares, que las células que expresaban IFN-γ, IL-2, TNF eran predominantemente células T CD4+ con un fenotipo de memoria. De acuerdo con nuestros datos de ARN, el porcentaje de células T CD4+ fue mayor en pacientes con escleritis que en sujetos sanos.

Analizamos la sangre periférica de treinta pacientes con uveítis inscritos en los ensayos clínicos del Departamento de Oftalmología del Hospital Xijing. Los datos demográficos de los pacientes, incluidos la edad, el sexo, el diagnóstico y los medicamentos en el momento de la recogida de la muestra.

Descripción de la muestra biológica:

Experimental: un fármaco: prednisona profesa convencer 1-1,5 mg/Kg.d Experimental: Fármaco B: metotrexato según 7,5-15 mg/w, brebaje con prednisona según 0,5-1 mg/Kg.d Métodos Células Tr CD4+CD25+, CTLA-4 y un ensayo de análisis de citoquinas intracelulares que midieron las células que expresan IFN-γ,IL-2,TNF en 30 pacientes con uveítis antes y después de 1 mes, 3 meses de prednisona y metotrexato.

Ensayos de citoquinas. Para la detección de citoquinas intracelulares, las células T CD4+ se cultivaron como se indicó anteriormente y se reestimularon durante 5 h con 1 mg/ml de forbol 12-miristato 13-acetato (PMA) e ionomicina (1 mg/ml) en presencia de Golgistop, agregamos anticuerpos (IFN -γ,IL-2,TNF). Realizamos la tinción de citocinas con BD Biosciences y analizamos las muestras mediante citometría de flujo.