BIFI-OBESE: Ensayo Clínico en Obesidad Pediátrica (BIFI-OBESE)

Diseño del estudio: un ensayo de control aleatorizado abierto piloto de un solo centro. Población: El estudio comprenderá un total de 100 sujetos de ambos sexos, entre 6 y 18 años de edad, obesos, según los criterios de la IOTF y con adiposidad visceral, como circunferencia de cintura ≥ percentil 90, estadio puberal ≥ 2 según la escala de Tanner etapa, HOMA-IR > 2,5 o insulina > 15 µU/ml, sin dieta previa o sin pérdida de peso (definida como -1 kg/m2 IMC en 1 año).

Criterios de inclusión/exclusión (ver Criterios de elegibilidad). Intervención: En la primera parte del estudio (Estudio 1, V0-V1) los pacientes serán aleatorizados en forma abierta, en dos grupos homogéneos en número y sexo de los sujetos. Un grupo recibirá un suplemento de probiótico que contiene Bifidobacterium breve B632 y Bifidobacterium breve BR03, 15 gtt/die (3x108 CFU/die) y un grupo recibirá un placebo por un total de 2 meses de tratamiento. Ambos grupos reciben una Dieta Estándar de acuerdo con el cuidado y la práctica de rutina. Para los pacientes que deseen continuar con el estudio, habrá un estudio cruzado (estudio 2, V2-V3) después de un mes de lavado.

Restricción dietética: La dieta estándar se distribuirá con un 55-60% de carbohidratos (45-50% complejos y no más del 10% azúcares refinados y procesados), 25-30% lípidos y 15% proteínas, y se realizará de acuerdo con las calorías de una dieta equilibrada isocalórica calculadas a través de las Directrices italianas LARN para edad y sexo.

Actividad física: todos los sujetos recibirán recomendaciones generales sobre la realización de actividad física. El ejercicio se realizará diariamente y consistirá en 30 minutos de actividad física aeróbica.

Aleatorización: los participantes serán asignados al azar en una proporción 1:1 al grupo de intervención de probióticos o al grupo de placebo.

Momento: Los pacientes serán evaluados en primer lugar en el momento de la inscripción (V0) y, al final de la primera parte del estudio (Estudio 1, V1), se completarán las evaluaciones bioquímicas. Luego habrá un mes de lavado cuando los pacientes no tomen ningún probiótico o placebo. En la segunda parte del estudio 2, los pacientes serán evaluados en V2 y, después de 2 meses de tratamiento (Estudio 2, V3). Se obtendrán las siguientes medidas antropométricas, evaluaciones bioquímicas y ecográficas y cuestionarios:

1. Medidas antropométricas:

   • altura (V0, V1, V2, V3);
   • peso (V0, V1, V2, V3);
   • índice de masa corporal (IMC; Kg/m2) (V0, V1, V2, V3);
   • circunferencias de cintura y cadera (V0, V1, V2, V3) para el cálculo de las siguientes relaciones: cintura/cadera, cintura/altura;
   • Etapa de Tanner (V0, V1, V2, V3);
   • presión arterial y frecuencia cardíaca (V0, V1, V2, V3). Evaluaciones bioquímicas (después de un ayuno nocturno de 12 h): CBC con fórmula, suero factor de crecimiento similar a la insulina 1 (IGF1, ng/mL), 25-hidroxi (OH) vitamina D (ng/mL), ácido úrico (mg/mL). dL), fosfatasa alcalina (U/L), ACTH (pg/mL), cortisol (microg/dL), TSH (uuI/mL), fT4 (ng/dL) (V0, V1, V2, V3); aspartato aminotransferasa (AST, UI/L), alanina aminotransferasa (ALT, UI/L); La proporción de AST a ALT se calculará como la proporción de AST (UI/L) y ALT (UI/L) (V0, V1, V2, V3); la concentración de creatinina sérica (mg/dL) se medirá con el método enzimático; De acuerdo con las Directrices NKF-K/DOQI para la ERC en niños y adolescentes, la TFGe se calculará utilizando la fórmula de Schwartz actualizada: TFGe (ml/min/1,73 m2) = [0,413 x altura del paciente (cm)]/creatinina sérica (mg/dL) (V0, V1, V2, V3); glucosa (mg/dL), insulina (μUI/mL); la resistencia a la insulina (IR) se calculará utilizando la fórmula de Homeostasis Model Assessment (HOMA)-IR: (insulina [mU/L] x glucosa [mmol/lL) / 22,5) (V0, V1, V2, V3); perfil lipídico: colesterol total (mg/dL), colesterol de lipoproteínas de alta densidad (HDL) (mg/dL), triglicéridos (mg/dL); El colesterol de lipoproteínas de baja densidad (LDL) se calculará mediante la fórmula de Friedwald y también se calculará el colesterol no HDL (nHDL) (V0, V1, V2, V3); prueba de tolerancia oral a la glucosa (TTOG: 1,75 g de solución glucosada por kg, máximo 75 g) y se recogerán muestras para la determinación de glucosa e insulina cada 30 min. El área bajo la curva (AUC) para los parámetros después de OGTT se calculará de acuerdo con la regla trapezoidal. La sensibilidad a la insulina en ayunas y durante la OGTT se calculará como la fórmula del índice de verificación de sensibilidad a la insulina cuantitativa (QUICKI) y el índice de Matsuda (ISI). El estímulo para la secreción de insulina en el incremento de la glucosa plasmática como índice insulinogénico se calculará como la relación de los cambios en la concentración de insulina y glucosa de 0 a 30 min (InsI). La capacidad compensatoria de las células beta será evaluada por el índice de disposición definido como el producto del ISI y el InsI (DI) (V0, V1, V2, V3); una colección en reposo de la muestra de orina de la primera mañana. Análisis físico y químico de orina; la albúmina en orina (mg/L) se determinará mediante un ensayo inmunoturbidimétrico avanzado y la creatinina en orina (mg/dL) se medirá mediante el método enzimático. La relación albúmina en orina a creatinina (u-ACR - mg/g), se calculará mediante la siguiente fórmula: [albúmina en orina (mg/dL) / creatinina en orina (mg/dL)] x 1000. Para estos cálculos tanto la albúmina como la creatinina estarán en la misma unidad. Los sujetos cuya orina resulte positiva, se les realizará una recolección de dos muestras más y se considerará el valor medio de u-ACR de estas (V0, V1, V2, V3). Se tomará una muestra de heces para recuento microbiano (V0, V1, V2, V3). LPS (V0, V1, V2, V3). El LPS se medirá con kits comerciales (ensayo de lisado de amebocitos de Limulus) con procedimientos estándar. Se evaluarán las citocinas IL1, IL1β, IL6, IL10, TNFα (V0, V1, V2, V3) (kit ELISA).
2. Se llevará un diario de salud durante los 2 meses de tratamiento: cada paciente completará el diario con efectos colaterales o tratamiento antibiótico etc.
3. Se analizará NGS (Next Generation Sequencing) para el análisis fecal (V0, V1, V2, V3)
4. Se realizará análisis metabolómico con espectrometría de masas en muestras fecales (V0, V1, V2, V3)
5. Análisis SCFA en muestras fecales (V0, V1, V2, V3).

Resultados (ver Medidas de resultado). Recuperación de información: Se completará un formulario de reporte de caso (CRF) para cada sujeto incluido en el estudio. Los documentos fuente serán la historia clínica del hospital o del médico.

Tamaño estadístico de la muestra: se ha estimado que una muestra de 16 individuos es suficiente para demostrar una diferencia de 10 mg/dl en la concentración de glucosa basal con una potencia del 90 % y un nivel de significación del 95 % y una tasa de abandono del 10 %. a las 8 semanas de tratamiento. Se ha estimado que una muestra de 34 individuos en cada grupo es suficiente para demostrar una diferencia de 1,4 puntos en el índice HOMA-IR con un poder del 90 % y un nivel de significación del 95 % y una tasa de abandono del 10 % en las 8 semanas de tratamiento. Se asumirá significancia estadística en P< 0.05. El análisis estadístico se realizará con SPSS para Windows versión 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, EE. UU.).

Características de la organización: El estudio se realizará en el Servicio de Endocrinología Pediátrica de la División de Pediatría.

Todas las muestras de sangre serán medidas evaluadas utilizando métodos estandarizados en el Laboratorio de Química del Hospital, en el hospital Maggiore della Carità, en Novara, descrito anteriormente. El análisis fecal se medirá en el Departamento de Ciencias y Tecnologías de la Universidad de Bolonia, en Bolonia.

Buena Práctica Clínica: El protocolo se llevará a cabo de acuerdo con la declaración de Helsinki. Se obtendrá el consentimiento informado de todos los padres antes de las evaluaciones después de explicaciones detalladas a cada paciente.