BIFI-OBESE: Badanie kliniczne otyłości u dzieci (BIFI-OBESE)

Projekt badania: jednoośrodkowe, pilotażowe, randomizowane, otwarte badanie kontrolne. Populacja: Badanie obejmie łącznie 100 osób obojga płci, w wieku od 6 do 18 lat, otyłych, według kryteriów IOTF, z otyłością trzewną, jako obwód talii ≥ 90 percentyla, w okresie dojrzewania ≥ 2 wg Tannera stadium, HOMA-IR > 2,5 lub insulina > 15 µU/ml, nieleczona dietą lub z niepowodzeniem odchudzania (określana jako -1 kg/m2 BMI w ciągu 1 roku).

Kryteria włączenia/wyłączenia (patrz Kryteria kwalifikowalności). Interwencja: W pierwszej części badania (Badanie 1, V0-V1) pacjenci zostaną losowo przydzieleni w ramach otwartej próby do dwóch grup jednorodnych pod względem liczby i płci badanych. Jedna grupa otrzyma suplementację probiotyku zawierającego Bifidobacterium breve B632 i Bifidobacterium breve BR03, 15 gtt/die (3x108 CFU/die), a jedna grupa otrzyma placebo na łącznie 2 miesiące leczenia. Obie grupy otrzymują standardową dietę zgodnie z rutynową opieką i praktyką. Dla pacjentów, którzy chcą kontynuować badanie, zostanie przeprowadzone badanie krzyżowe (badanie 2, V2-V3) po miesiącu wypłukiwania.

Ograniczenia dietetyczne: Standardowa dieta będzie składała się z 55-60% węglowodanów (45-50% złożonych i nie więcej niż 10% rafinowanych i przetworzonych cukrów), 25-30% tłuszczów i 15% białek i będzie prowadzona zgodnie z z kaloriami zbilansowanej diety izokalorycznej obliczonymi zgodnie z włoskimi wytycznymi LARN dla wieku i płci.

Aktywność fizyczna: wszyscy badani otrzymają ogólne zalecenia dotyczące wykonywania aktywności fizycznej. Ćwiczenia będą prowadzone codziennie i będą polegać na 30 minutach aerobowej aktywności fizycznej.

Randomizacja: Uczestnicy zostaną losowo przydzieleni w stosunku 1:1 do probiotycznej grupy interwencyjnej lub grupy placebo.

Harmonogram: Pacjenci zostaną poddani pierwszej ocenie w momencie włączenia (V0), a pod koniec pierwszej części badania (Badanie 1, V1) zostaną zakończone oceny biochemiczne. Następnie nastąpi miesiąc wypłukiwania, kiedy pacjenci nie będą przyjmować żadnego probiotyku ani placebo. W drugiej części badania 2 pacjenci będą oceniani w V2 i po 2 miesiącach leczenia (Badanie 2, V3). Uzyskane zostaną następujące pomiary antropometryczne, oceny biochemiczne i ultrasonograficzne oraz kwestionariusze:

1. Miary antropometryczne:

   • wysokość (V0, V1, V2, V3);
   • waga (V0, V1, V2, V3);
   • wskaźnik masy ciała (BMI; kg/m2) (V0, V1, V2, V3);
   • obwody talii i bioder (V0, V1, V2, V3) do wyliczenia proporcji: talia/biodra, talia/wzrost;
   • Etap Tannera (V0, V1, V2, V3);
   • ciśnienie krwi i tętno (V0, V1, V2, V3). Oceny biochemiczne (po 12-godzinnym poście przez noc): CBC z formułą, insulinopodobny czynnik wzrostu 1 w surowicy (IGF1, ng/ml), 25-hydroksy(OH)witamina D (ng/ml), kwas moczowy (mg/ dL), fosfataza alkaliczna (U/l), ACTH (pg/ml), kortyzol (mikrorog/dl), TSH (uul/ml), fT4 (ng/dl) (V0, V1, V2, V3); aminotransferaza asparaginianowa (AST, j.m./l), aminotransferaza alaninowa (ALT, j.m./l); Stosunek AST do ALT zostanie obliczony jako stosunek AST (j.m./l) do ALT(j.m./l) (V0, V1, V2, V3); stężenie kreatyniny w surowicy (mg/dl) będzie mierzone metodą enzymatyczną; zgodnie z wytycznymi NKF-K/DOQI dotyczącymi CKD u dzieci i młodzieży, eGFR będzie obliczany przy użyciu zaktualizowanego wzoru Schwartza: eGFR (ml/min/1,73 m2) = [0,413 x wzrost pacjenta (cm)] / kreatynina w surowicy (mg/dl) (V0, V1, V2, V3); glukoza (mg/dl), insulina (μUI/ml); insulinooporność (IR) zostanie obliczona przy użyciu wzoru Homeostasis Model Assessment (HOMA)-IR: (insulina [mU/L] x glukoza [mmol/lL) / 22,5) (V0, V1, V2, V3); profil lipidowy: cholesterol całkowity (mg/dl), lipoproteiny o dużej gęstości (HDL)-cholesterol (mg/dl), trójglicerydy (mg/dl); Lipoproteiny o niskiej gęstości (LDL)-cholesterol zostaną obliczone za pomocą wzoru Friedwalda, a cholesterol nie-HDL (nHDL) zostanie również obliczony (V0, V1, V2, V3); doustny test obciążenia glukozą (OGTT: 1,75 g roztworu glukozy na kg, maksymalnie 75 g) oraz pobieranie próbek do oznaczania glukozy i insuliny co 30 min. Pole pod krzywą (AUC) dla parametrów po OGTT zostanie obliczone zgodnie z zasadą trapezów. Wrażliwość na insulinę na czczo i podczas OGTT zostanie obliczona ze wzoru na ilościowy wskaźnik wrażliwości na insulinę (QUICKI) i wskaźnik Matsudy (ISI). Bodziec do wydzielania insuliny w przyroście glukozy w osoczu jako indeks insulinogenny zostanie obliczony jako stosunek zmian stężenia insuliny i glukozy od 0 do 30 min (InsI). Zdolność kompensacyjna komórek beta zostanie oceniona za pomocą wskaźnika dyspozycji zdefiniowanego jako iloczyn ISI i InsI (DI) (V0, V1, V2, V3); zbiór w spoczynku pierwszej porannej próbki moczu. Fizyczna i chemiczna analiza moczu; albumina w moczu (mg/l) zostanie oznaczona za pomocą zaawansowanego testu immunoturbidymetrycznego, a kreatynina w moczu (mg/dl) zostanie zmierzona metodą enzymatyczną. Stosunek albuminy do kreatyniny w moczu (u-ACR - mg/g) zostanie obliczony według następującego wzoru: [albumina w moczu (mg/dl) / kreatynina w moczu (mg/dl)] x 1000. W tych obliczeniach zarówno albumina, jak i kreatynina będą wyrażone w tej samej jednostce. Osobnicy, których mocz zostanie uznany za pozytywny, zostaną pobrani z dwóch kolejnych próbek i będą brane pod uwagę ich średnie wartości u-ACR (V0, V1, V2, V3). Próbka kału zostanie pobrana na liczbę drobnoustrojów (V0, V1, V2, V3). LPS (V0, V1, V2, V3). LPS będzie mierzony za pomocą komercyjnych zestawów (test lizatu amebocytów Limulus) przy użyciu standardowych procedur. Oceniane będą cytokiny IL1, IL1β, IL6, IL10, TNFα (V0, V1, V2, V3) (zestaw ELISA).
2. Przez 2 miesiące leczenia będzie prowadzony dzienniczek zdrowia: każdy pacjent będzie uzupełniał dzienniczek o efekty uboczne lub antybiotykoterapię itp.
3. NGS (sekwencjonowanie nowej generacji) zostanie przeanalizowane pod kątem analizy kału (V0, V1, V2, V3)
4. Analiza metaboliczna zostanie przeprowadzona za pomocą spektrometrii mas na próbkach kału (V0, V1, V2, V3)
5. Analiza SCFA na próbkach kału (V0, V1, V2, V3).

Wyniki (patrz Miary wyników). Wyszukiwanie informacji: Formularz opisu przypadku (CRF) zostanie wypełniony dla każdego podmiotu objętego badaniem. Dokumentem źródłowym będzie karta szpitala lub lekarza.

Statystyczna wielkość próby: Oszacowano, że próba 16 osób jest wystarczająca do wykazania różnicy 10 mg/dl w podstawowym stężeniu glukozy z mocą 90% i poziomem istotności 95% oraz odsetkiem rezygnacji wynoszącym 10% w 8 tygodniu leczenia. Oszacowano, że próba 34 osób w każdej grupie jest wystarczająca do wykazania różnicy 1,4 punktu w indeksie HOMA-IR z mocą 90% i poziomem istotności 95% oraz wskaźnikiem rezygnacji wynoszącym 10% na poziomie 8 tydzień leczenia. Przyjmuje się, że istotność statystyczna wynosi P<0,05. Analiza statystyczna zostanie przeprowadzona za pomocą SPSS dla Windows w wersji 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).

Charakterystyka organizacji: Badanie będzie prowadzone w Poradni Endokrynologicznej Oddziału Pediatrii Dziecięcej.

Wszystkie próbki krwi zostaną zmierzone i ocenione przy użyciu standardowych metod w Szpitalnym Laboratorium Chemii w szpitalu Maggiore della Carità w Novara, jak opisano wcześniej. Analiza kału zostanie zmierzona na Wydziale Nauk i Technologii Uniwersytetu Bolońskiego w Bolonii.

Dobra Praktyka Kliniczna: Protokół zostanie przeprowadzony zgodnie z deklaracją helsińską. Świadoma zgoda zostanie uzyskana od wszystkich rodziców przed oceną, po dokładnym wyjaśnieniu każdego pacjenta.